| 主权项 |
1.一种嵌合型猪假性狂犬病病毒(PRV-pGH),其寄存编号为CCRC 970001。2.如申请专利范围第1项之病毒,其基因组单一短区(Us)内之部份gp63基因及全长gI基因已被删除约3.0仟硷基对之DNA序列,并于删除位置嵌入有猪生长激素之编码DNA序列。3.如申请专利范围第1项之病毒,其母株病毒系由中国台湾地区分离而得之猪假性狂犬病病毒强毒株PRV-LC株。4.如申请专利范围第1项之病毒,其感染宿主细胞后,除了可正常复制病毒本身,亦可产制猪生长激素。5.如申请专利范围第1项之病毒,其为弱毒病毒。6.如申请专利范围第1至5项中任一项之病毒,其系由PRV病毒基因组DNA与猪生长激素基因于哺乳动物细胞内同类重组后,以抗gI之单株抗体(FTpn3)负向筛选而得者。7.如申请专利范围第6项之病毒,其中该抗gI单株抗体为可中和猪假性狂犬病病毒之单株抗体。8.一种预防猪假性狂犬病感染之疫苗,其包含有效免疫剂量之如申请专利范围第1项之嵌合型猪假性狂犬病病毒,及佐剂或稀释剂。9.如申请专利范围第8项之疫苗,其中该病毒系由PRV基因组DNA与猪生长激素基因于哺乳动物细胞内同类重组后,以抗gI之单株抗体(FTpn3)负向筛选而得者。10.如申请专利范围第9项之疫苗,其中该抗gp63之单株抗体为可中和猪假性狂犬病病毒之单株抗体。11.如申请专利范围第8至10项中任一项之疫苗,其除了可预防猪假性狂犬病感染之外,兼可促进仔豕生长发育及母猪泌乳。12.如申请专利范围第8至10项中任一项之疫苗,其为减毒疫苗。13.一种制造如申请专利范围第1项之病毒的方法,其包括如下步骤:(1)由中国台湾本地单离及纯化猪假性狂犬病病毒母株病毒;(2)以DNA水解删除位于PRV单一短区(Us)内之部份gp63基因及全长gI基因之DNA序列,制得不含部份gp63基因及全长gI基因之DNA片段,将其殖入转移质体;(3)与含有猪生长激素编码DNA序列之表现载体混合,且与猪假性狂犬病母株病毒共同转感哺乳动物细胞以令其发生重组;(4)加入抗PRVgI之单株抗体至培养基中,进行负向筛选;及(5)培养适当时间后,单离纯化病毒且监定猪生长激素表现之情形。14.如申请专利范围第13项之方法,其中该母株病毒为PRV-LC株。15.如申请专利范围第13项之方法,其中该抗PRV gI单株抗体是中和抗体。16.如申请专利范围第13项之方法,其所制得的病毒为不含部份gp63基因及全长gI之弱毒病毒。图式简单说明:第一图:猪假性狂犬病病毒的DNA结构及其醣蛋白所在之位置。第二图:FTpn3对PRV野外毒株,PRV-LC株病毒(0-0),及PRV-pGH病毒(-)的中和作用图。第三图:PRV(Ka)株之DNA图谱。第四图:构筑pLC5,pLC11及pLC5r之流程图。第五图:重组PRV的DNA分析图。第六图:PRV-pGH病毒的DNA分析图。第七图:新构筑之PRV图谱。第八图:PRV-pGH之猪生长激素疫沾染分析。第九图:PRV-LC株病毒DNA经BamH1切割之图谱。第十图:PLC pGH之转录方向分析。第十一图:重组质体之限制图谱。第十二图:重组PRV之免疫沾染分析。 |
