一种人脐带间充质干细胞分离培养方法

摘要

本发明提供了一种人脐带间充质干细胞分离培养方法，包括以下步骤：取足月剖宫产胎儿脐带，无菌条件下用PBS冲洗，去除血迹；在动物细胞培养基中用无菌剪刀将洗净的脐带剪成组织块，去除其血管并弄碎，然后与动物细胞培养基充分混合振荡后离心，将离心所得的沉淀与MesenCult‑XF完全培养基混合震荡均匀种植于细胞培养皿中，置于37℃，5％CO₂培养箱中培养；培养第5天，将组织块全部吸出弃去，补加MesenCult‑XF完全培养基，之后每隔3天更换培养基继续培养，获得脐带间充质干细胞。本发明不使用动物血清，操作简单，重复性好，安全性高，所获细胞经多次传代后稳定。

主权项

一种人脐带间充质干细胞分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取足月剖宫产胎儿脐带，无菌条件下用PBS冲洗，去除残留血迹；(2)在动物细胞培养基中用无菌剪刀将步骤(1)中洗净的脐带剪成组织块，去除组织块的血管并将组织块弄碎；组织块弄碎的方法为剪碎或者使用组织块匀浆机直接绞碎；(3)将步骤(2)中弄碎的组织块置于离心管中与动物细胞培养基充分混合振荡后离心，离心机速度为1600～2200转/分钟，离心5～10分钟弃去上清，重复2～4遍；所用的动物细胞培养基为RPMI MEDIUM 1640培养基或者DMEM培养基；(4)将离心沉淀部分与配置好的MesenCult‑XF完全培养基混合震荡均匀种植于细胞培养皿中，并置于37℃，5％CO₂培养箱中培养；MesenCult‑XF完全培养基的组分为20％MesenCult‑XFSupplement+80%MesenCult‑XF Basal Medium+2mM L‑Glutamine(5)培养第5天，将组织块全部吸出弃去，补加MesenCult‑XF完全培养基，且显微镜下观察到贴壁的梭形或多边形的细胞，之后每隔3天更换一次培养基，继续培养；(6)培养第12～15天，细胞约80％融合，以MesenCult‑XF Enzymatic Dissociation Solution消化，并以MesenCult‑XFEnzymatic Inhibition Solution终止消化，按1∶3传代，之后每3天传一代，最终得到充足的间 充质干细胞。