一种同时分离纯化试剂级的藻蓝蛋白与别藻蓝蛋白的方法

摘要

本发明提供一种同时分离纯化试剂级的藻蓝蛋白与别藻蓝蛋白的方法，先将蓝藻破壁并固液分离得到藻胆蛋白粗提液，再进行两步盐析，获得沉淀后用磷酸盐缓冲液溶解，并用磷酸盐缓冲液作为透析液将溶解后的溶液透析，以获得透析后的藻胆蛋白溶液，最后进行纤维素柱层析以及羟基磷灰石柱层析，以获得了试剂级的藻蓝蛋白和试剂级的别藻蓝蛋白。本发明以水华新鲜蓝藻为原料，通过采用盐析联合柱层析分离纯化试剂级藻蓝蛋白和试剂级别藻蓝蛋白，与传统层析法工艺相比，在兼顾蛋白质回收率的前提下，能同时提取纯化两种高纯度的藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白，提高了蓝藻细胞中高价值蛋白综合提取纯化的效率，并且可以放大。

主权项

一种同时分离纯化试剂级的藻蓝蛋白与别藻蓝蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1，将蓝藻进行破壁以产生藻液，将所述藻液进行固液分离，所得液体即为藻胆蛋白粗提液；S2，向所述藻胆蛋白粗提液中加入适量硫酸铵，混匀并静置后离心，获得上清液；S3，向步骤S2中获得的上清液中追加适量硫酸铵，混匀并静置后离心，获得沉淀；S4，将步骤S3中获得的沉淀用磷酸盐缓冲液溶解，并用磷酸盐缓冲液作为透析液将溶解后的溶液透析脱盐，脱盐后的溶液再离心弃去变性蛋白以获得透析后的藻胆蛋白溶液；S5，将步骤S4中透析后的藻胆蛋白溶液，过平衡好的纤维素层析柱，并依次用含不同离子强度的洗脱液洗脱，分别收集洗脱的组分，检测组分中藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的纯度和浓度，将主要富含藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的组分用磷酸盐缓冲液作为透析液进行透析脱盐以获得含藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的混合液；S6，将步骤S5中获得的混合液过平衡好的羟基磷灰石层析柱，并依次用含不同离子强度的洗脱液洗脱，分别收集洗脱的组分，以获得了试剂级的藻蓝蛋白和试剂级的别藻蓝蛋白。