一种乳酸菌胞外蛋白的提取方法及应用

摘要

本发明公开了一种乳酸菌胞外蛋白的提取方法及应用，该方法能够较高水平地获得乳酸菌分泌的胞外蛋白，制备过程简单，成本低廉，适用于规模化生产。包括下述步骤：将乳酸菌接种于改良番茄汁培养基于37℃厌氧条件下进行培养；刮下培养的乳酸菌菌苔，转移至pH值为7.2～7.4的磷酸盐缓冲液重悬，之后振荡，离心除菌体，收集上清液；经透析除盐、浓缩得到乳酸菌胞外蛋白的粗提液；将乳酸菌胞外蛋白的粗提液进行Sephadex G‑100葡聚糖凝胶层析，收集含有蛋白峰的蛋白溶液，得到纯化的乳酸菌胞外蛋白。对其进行分子量鉴定，分子量为67KD和37KD。通过两种嗜酸乳杆菌胞外蛋白的应用试验，67KD和37KD胞外蛋白对HT‑29细胞的生长具有不同的抑制功效。

主权项

一种乳酸菌胞外蛋白的提取方法，其特征在于，包括下述步骤：(1)乳酸菌的培养：将乳酸菌接种于改良番茄汁培养基于37℃厌氧条件下进行培养；所述改良番茄汁培养基的组成为：每1000mL水中含有新鲜番茄汁50－60mL、酵母浸膏3‑7g、牛肉浸膏8‑12g、乳糖18‑25g、葡萄糖1‑4g、吐温60‑90mL、醋酸钠6‑8g和琼脂粉12‑18g，所述改良番茄汁培养基的pH值为6.8±0.2；(2)乳酸菌胞外蛋白的粗提取：刮下步骤(1)中培养的乳酸菌菌苔，转移至pH值为7.2～7.4的磷酸盐缓冲液重悬，之后振荡，离心除菌体，收集上清液；经透析除盐、浓缩得到乳酸菌胞外蛋白的粗提液；(3)Sephadex G‑100葡聚糖凝胶层析：将步骤(2)中得到的乳酸菌胞外蛋白的粗提液进行Sephadex G‑100葡聚糖凝胶层析，收集含有蛋白峰的蛋白溶液，得到纯化的乳酸菌胞外蛋白；所述乳酸菌为嗜酸乳杆菌；步骤(3)中收集两个蛋白峰，对步骤(3)中的两个蛋白峰通过SDS‑PAGE电泳进行分子量的检测，两个蛋白峰的分子量分别为67KD和37KD。