表达DNase I、AIF或整合有该毒素的重组单链抗体的载体菌株及该菌株的应用

摘要

本发明提供了一种表达DNase I、AIF或整合有该毒素的重组单链抗体的载体菌株及该菌株的应用。该技术方案依托于一种特异性识别TEM1蛋白的单链抗体，结合减毒鼠伤寒沙门氏菌VNP20009的肿瘤内特异性聚集及胞内侵袭的特性，携带人源毒素DNase I和Aif达到特异性杀伤肿瘤的效果。具体来看，本发明首先构建了Abvec‑Igk‑DNase I、Abvec‑Igk‑T18‑DNase I、Abvec‑Igk‑Aif、Abvec‑Igk‑T18‑Aif重组质粒，经扩增后通过电击转化的方式导入鼠伤寒沙门氏菌VNP20009株，利用减毒鼠伤寒沙门氏菌胞内侵袭的特性，以HEK293‑T细胞为宿主实现蛋白的表达，最后利用含青霉素、链霉素的血清培养基杀死细胞内外的减毒鼠伤寒沙门氏菌，使重组质粒释放至真核细胞中，经细胞破碎后即得到含有目的蛋白的上清液。

主权项

表达DNase I、AIF或整合有该毒素的重组单链抗体的载体菌株，其特征在于该菌株是由以下方法制备的：1)取序列如SEQ ID No.1所示的T18‑DNase I表达基因、序列如SEQ ID No.2所示的DNase I表达基因、序列如SEQ ID No.3所示的T18‑AIF表达基因、序列如SEQ ID No.4所示的AIF表达基因，分别通过酶切方式与Abvec‑Igk质粒连接，分别得到重组质粒Abvec‑Igk‑T18‑DNase I、Abvec‑Igk‑DNase I、Abvec‑Igk‑T18‑Aif、Abvec‑Igk‑Aif；2)分别取步骤1)所得重组质粒Abvec‑Igk‑T18‑DNase I、Abvec‑Igk‑DNase I、Abvec‑Igk‑T18‑Aif、Abvec‑Igk‑Aif，在宿主细胞中进行质粒扩增；3)分别收集步骤2)扩增后的重组质粒Abvec‑Igk‑T18‑DNase I、Abvec‑Igk‑DNase I、Abvec‑Igk‑T18‑Aif、Abvec‑Igk‑Aif，分别通过电转法导入处于感受态的鼠伤寒沙门氏菌VNP20009株中，即得到所述表达DNase I、AIF或整合有该毒素的重组单链抗体的载体菌株。