链霉素、四环素类二合一金标微孔试纸条

摘要

本发明公开了一种链霉素、四环素类二合一金标微孔试纸条。本发明提供的试剂盒，包括至少具有一个样品槽的样品板和至少一个试纸条；样品槽的底部附着有链霉素特异性抗体的胶体金标记物和四环素特异性抗体的胶体金标记物；试纸条包括底板（1）、反应膜（2）、样品吸收垫（3）和吸水垫（4）；样品吸收垫、所述反应膜和所述吸水垫依次附着于所述底板上；反应膜上由始端至末端依次具有T₂线、T₁线和C线；T₂线和T₁线上分别包被如下两种偶联物：四环素‑载体蛋白偶联物、链霉素‑载体蛋白偶联物；C线上包被抗抗体。本发明提供的试剂盒具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。

主权项

一种用于检测链霉素和四环素类的试剂盒，包括至少具有一个样品槽的样品板和至少一个试纸条；所述样品槽的底部附着有链霉素特异性抗体的胶体金标记物和四环素特异性抗体的胶体金标记物；所述试纸条包括底板(1)、反应膜(2)、样品吸收垫(3)和吸水垫(4)；所述样品吸收垫、所述反应膜和所述吸水垫依次附着于所述底板上，所述样品吸收垫的末端与所述反应膜的始端相连，所述反应膜的末端与所述吸水垫的始端相连；所述反应膜上由始端至末端依次具有T₂线、T₁线和C线，所述T₂线、T₁线和C线均与所述反应膜的轴线垂直；所述T₂线和T₁线上分别包被如下两种偶联物：四环素‑载体蛋白偶联物、链霉素‑载体蛋白偶联物；所述C线上包被可与链霉素特异性抗体和/或四环素特异性抗体结合的抗抗体；所述链霉素‑载体蛋白偶联物中，所述载体蛋白为BSA，链霉素与BSA的摩尔结合比为8∶1；所述四环素‑载体蛋白偶联物中，所述载体蛋白为BSA，四环素与BSA的摩尔结合比为12∶1；所述链霉素‑载体蛋白偶联物的制备方法具体如下：(1)取2.544g碳酸钠，溶于24ml水；(2)取432mg硫酸链霉素，溶于12ml步骤(1)得到的碳酸钠溶液；(3)取300mg BSA，溶于12ml步骤(1)得到的碳酸钠溶液；(4)将步骤(2)得到的链霉素溶液加入步骤(3)得到的BSA溶液中并混匀，然后加入2.4ml体积比为10％戊二醛水溶液并室温搅拌45min，然后加入6ml 20mg/ml NaBH₄水溶液并4℃静置过夜，然后用pH7.2、0.01M PBS缓冲液进行透析，然后4500rpm离心6min并取上清液；所述四环素‑载体蛋白偶联物的制备方法具体如下：(1)取50mg四环素，溶于2ml甲醇；(2)取60mg BSA，溶于3ml pH4.5、0.1mol/L醋酸钠缓冲液；(3)将步骤(1)得到的四环素溶液加入步骤(2)得到的BSA溶液中，然后加入140μL体积比为10％甲醛水溶液并室温搅拌8h，然后用纯水进行透析，然后4500rpm离心6min并取上清液；所述链霉素特异性抗体的胶体金标记物和所述四环素特异性抗体的胶体金标记物的制备方法均如下：(1)在沸腾的100mL的0.01g/100ml氯金酸水溶液中加入2‑4mL的1％柠檬酸三钠水溶液，获得终浓度为0.01％、直径为15‑20nm的胶体金溶液；(2)用0.1mol/L的K₂CO₃水溶液调胶体金溶液的pH至8.5；(3)将1μL 10mg/mL的链霉素特异性抗体溶液或四环素特异性抗体溶液加入1mL步骤(2)得到的胶体金溶液中并搅拌30分钟，然后加入10μL 20g/100ml的BSA水溶液并搅拌15min，然后加入10μL 10g/100ml的PEG₈₀₀₀水溶液并搅拌15分钟，然后4℃、4000g离心15min取上清液，然后4℃、12000g离心20分钟取沉淀；(4)用pH7.2、2mM PBS缓冲液溶解步骤(3)得到的沉淀，4℃、12000g离心20分钟取沉淀，然后用200μL含1g/100ml BSA pH7.2、2mM的PBS缓冲液重悬沉淀，得到特异性抗体的胶体金标记物；所述四环素类为四环素和/或金霉素和/或多西霉素。