一种修饰龙舌兰麻SOD冻干粉的制备方法

摘要

本发明涉及一种修饰龙舌兰麻SOD冻干粉的制备方法，属于有机合成及应用技术领域，其以微波辅助琥珀酸酐（SA）和N‑羟基琥珀酰亚胺（NHS）活化单甲氧基聚乙二醇（mPEG）为活化修饰剂，以龙舌兰麻超氧化物歧化酶（SOD）为修饰对象，制备修饰龙舌兰麻SOD修饰物。该活化修饰剂制备方法，利用微波辅助加热，大大缩短活化时间，提高活化效率；该龙舌兰麻SOD利用上述活化修饰剂进行修饰，制备修饰SOD修饰物；所得修饰物耐热、耐酸碱，以及抗蛋白酶解能力均比天然龙舌兰麻超氧化物歧化酶高，免疫原性下降或消除。

主权项

一种修饰龙舌兰麻SOD冻干粉的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：A．微波辅助活化单甲氧基聚乙二醇mPEG合成活化修饰剂：将100~120份质量mPEG，3~6份质量SA，80~120份质量DMF混合均匀得混合物；将混合物置于微波炉回流装置中微波辐射，停止辐射待混合物冷却到室温，搅拌下加入无水乙醚或石油醚，使沉淀完全；抽滤，弃滤液留沉淀；搅拌下向所得沉淀中加入有机溶剂，直到沉淀完全溶解，抽滤，弃沉淀留滤液；在所得滤液中再加入无水乙醚或石油醚使其沉淀完全，抽滤，弃滤液留沉淀；重复上述操作3~5次，得到中间产物I：单甲氧基聚乙二醇琥珀酸酯mPEG‑S；所述上述操作是指搅拌下向所得沉淀中加入有机溶剂，直到沉淀完全溶解，抽滤，弃沉淀留滤液；在所得滤液中再加入无水乙醚或石油醚使其沉淀完全，抽滤，弃滤液留沉淀；在40~45℃下热浴，在中间产物I中加入3~5份质量NHS、80~120份质量DMF和5~8份质量二环己基碳二亚胺（DCC），混合均匀，取出，置于室温下过夜得到反应混合物；反应混合物再次置于40~45℃下热浴，直至混合物中的沉淀不再溶解为止；取出，趁热抽滤，弃滤渣留滤液；向所得滤液滴加无水乙醚或石油醚使其沉淀完全，抽滤；所得沉淀用有机溶剂溶解后，加入无水乙醚或石油醚使其沉淀完全，抽滤；重复操作3~5次；最后将所得沉淀真空干燥，为最终产物II：活化修饰剂单甲氧基聚乙二醇琥珀酸琥珀酰亚胺酯mPEG‑SS；B．mPEG‑SS修饰龙舌兰麻SOD：将龙舌兰麻SOD粉和mPEG‑SS，按1:10～1:80摩尔比溶解于350~550份硼酸盐缓冲溶液，室温振荡反应1～3小时，然后在反应液中加入100~150份体积的冷磷酸盐缓冲溶液PBS，终止反应，所得混合溶液用PBS缓冲溶液透析、浓缩，立即上预先平衡好的Sephadex葡聚糖凝胶层析柱洗脱分离，收集280nm第一峰，冷冻干燥得修饰龙舌兰麻SOD冻干粉；步骤A所述的有机溶剂为DMF、二氯甲烷、三氯甲烷或四氯化碳；步骤B所述的冷磷酸盐缓冲溶液PBS的浓度为1mol/L ，pH值为7.0，温度为0~5℃。