日本白鲫与团头鲂亚科间远缘杂交的方法和四倍体杂交鱼的应用

摘要

一种日本白鲫与团头鲂亚科间远缘杂交的方法，其是以日本白鲫为母本，以团头鲂为父本，将性成熟的日本白鲫的卵子与团头鲂的精子进行人工干法受精，受精卵在19℃～20℃水温下孵化，鱼苗在池塘中饲养；再利用流式细胞DNA含量测定法、外周血细胞培养的染色体倍性检测方法和血涂片法对鱼苗进行DNA含量、染色体数目以及血细胞大小的检测，筛选后制备得到三倍体杂交鱼和四倍体杂交鱼。将四倍体杂交鱼通过后续自交选育，可形成一个遗传稳定的具有四套白鲫染色体的四倍体鱼品系，并可用该四倍体鱼品系作为繁殖不育三倍体鱼的资源。本发明的方法不仅杂交后代性状优良，而且能为品种选育奠定良好基础，为后续新型多倍体鱼的选育提供宝贵资源。

主权项

一种日本白鲫与团头鲂亚科间远缘杂交的方法，其特征在于：所述方法是以日本白鲫为母本，以团头鲂为父本，将性成熟的日本白鲫的卵子与团头鲂的精子进行人工干法受精，受精卵在19℃～20℃水温下孵化，鱼苗在池塘中饲养；再利用流式细胞DNA含量测定法、外周血细胞培养的染色体倍性检测方法和血涂片法对鱼苗进行DNA含量、染色体数目以及血细胞大小的检测，筛选后制备得到三倍体杂交鱼和四倍体杂交鱼；所述方法具体包括以下步骤：（1）亲鱼的选择和培育：在繁殖期前3～4个月，挑选性成熟特征明显、体征良好的雌性日本白鲫和雄性团头鲂分别作为远缘杂交的母本亲鱼和父本亲鱼进行专池培育，保持水质良好；在繁殖期前一个月左右以精饵饲养，每隔2～3天流水刺激一次，以促进亲鱼性腺发育成熟；（2）人工催产：在当年的5月中旬至6月上旬，当水温稳定在20℃以上时，为亲鱼注射黄体素释放激素类似物与绒毛膜促性腺激素的混合催产剂进行催产，所述黄体素释放激素类似物的用量为10μg/kg，绒毛膜促性腺激素的用量为600 IU/kg；先注射母本亲鱼，4～5 h后再注射父本亲鱼，父本亲鱼的注射剂量减半；注射完毕后按1∶6～8的数量比将母、父本亲鱼放入同一产卵池中，然后视水情及时向池中冲水；在产卵前3～4 h，注入一定水量后，停止注水，让鱼在静水中催产，直至其开始顺利产卵和产精；（3）授精孵化：挑选产卵顺利的母本亲鱼，然后与产精量大的父本亲鱼进行人工干法授精，受精卵置于水温为19℃～20℃的培养皿中静水孵化；（4）饲养：待鱼苗全部孵出后，于孵化环道中继续培育2～3天，待鱼苗出现腰点后将鱼苗转入预先培肥的池塘中饲养，1～2天后泼洒豆浆，2～3次/天；再利用流式细胞DNA含量测定法、外周血细胞培养的染色体倍性检测方法和血涂片法对鱼苗进行DNA含量、染色体数目以及血细胞大小的检测，筛选后制备得到三倍体杂交鱼和四倍体杂交鱼。