发明名称 |
六瓣红大蒜蒜酶灭活提取物HPLC指纹图谱的建立方法 |
摘要 |
本发明公开了一种宝坻“六瓣红”大蒜蒜酶灭活提取物HPLC指纹图谱的建立方法,具体步骤为将宝坻特有品种“六瓣红”鳞茎经固相萃取等步骤制备成供试品溶液,在一定条件下进行高效液相色谱分析检测,获得“六瓣红”大蒜蒜酶灭活提取物的HPLC指纹图谱。通过对10批次样品的HPLC指纹图谱分析,确定共有特征峰,得到标准指纹图谱。该标准指纹图谱能够为“六瓣红”大蒜的品种及产地鉴别和生产质量控制提供可靠的依据。本发明操作便捷,稳定性高,特异性强,重现性好,特征峰较多,分析效率高,利用本发明将能对“六瓣红”大蒜进行真伪及产地鉴别,并能全面、准确、有效的评价其内在品质质量。 |
申请公布号 |
CN105158369B |
申请公布日期 |
2017.02.22 |
申请号 |
CN201510558298.2 |
申请日期 |
2015.09.06 |
申请人 |
天津师范大学 |
发明人 |
王振英;尚云涛;任春雪;范宝莉;刘晓颖;党光;彭永康;陈宏;王中良 |
分类号 |
G01N30/88(2006.01)I;G01N30/06(2006.01)I |
主分类号 |
G01N30/88(2006.01)I |
代理机构 |
天津市杰盈专利代理有限公司 12207 |
代理人 |
朱红星 |
主权项 |
一种六瓣红大蒜蒜酶灭活提取物HPLC指纹图谱的构建方法,其特征在于按如下的步骤进行:(1)大蒜蒜酶灭活提取物待测溶液的制备:称取六瓣红大蒜鳞茎20g,加25‑30ml蒸馏水,90℃灭酶1h,破碎研磨,加甲醇定容至50ml,5000×g离心15min,取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤;(2)大蒜蒜酶灭活提取物供试品溶液的制备:C18固相萃取小柱经5ml甲醇、10ml超纯水活化,平衡15min;待测溶液以4ml/min速度过柱,再用5ml超纯水淋洗,低真空抽干;再由5ml甲醇洗脱后,室温下低流速氮气浓缩至0.5‑0.8ml,再以甲醇定容至1ml,经0.45μm微孔滤膜过滤待测;(3)高效液相色谱分析:色谱柱为:Eclipse Plus C18,5μm,4.6x250mm;保护柱为:Eclipse Plus C18 Grd,5μm,4.6x12.5mm;柱温35℃;流动相为甲醇和0.2%甲酸水溶液;采用梯度淋洗方式0→2 min→10 min→20 min,甲醇:60%→60%→80%→80%;二极管阵列检测器检测波长240nm;进样量50μL;在上述条件下分析供试品溶液,得到大蒜蒜酶灭活提取物HPLC指纹图谱;(4)重复上述(1)至(3),对10批次六瓣红大蒜蒜酶灭活提取物建立HPLC指纹图谱,通过比较分析确定了15个共有特征峰,其保留时间分别为:2.16 min、2.748 min、2.94 min、3.379 min、3.813 min、4.719 min、5.839 min、6.439 min、7.074 min、8.002 min、9.131 min、10.615 min、13.069 min、15.314 min、18.325 min,相对标准偏差(RSD)<1%,这些共有特征峰构成了六瓣红大蒜蒜酶灭活提取物HPLC标准指纹图谱。 |
地址 |
300387 天津市西青区宾水西道393号 |