油用牡丹种子总RNA及其提取方法

摘要

本发明提供了一种油用牡丹种子总RNA及其提取方法，涉及RNA提取技术领域，所述油用牡丹种子总RNA提取方法以多糖多酚植物总RNA提取试剂盒为基础，通过多次添加液氮对油用牡丹种子进行充分研磨，有利于细胞更好的破碎，防止RNA的降解；通过将定量的油用牡丹种子粉末进行分装裂解，使得分装后的每组油用牡丹种子粉末在裂解液中裂解更充分，有利于RNA的释放；采用分装过滤，使得上层的油脂和下层多糖、多酚沉淀物可以被有效去除；在吸附过程中将各组乙醇沉淀的RNA混合液合并到同一吸附柱进行处理，保证了总RNA的富集和产量；采用该法对油用牡丹种子总RNA进行提取，操作简单，用时少，所提取的RNA质量好、得率高。

主权项

一种油用牡丹种子总RNA提取方法，其特征在于，主要包括以下步骤：(1)多次添加液氮对油用牡丹种子进行研磨，得到油用牡丹种子粉末；(2)将100‑150mg油用牡丹种子粉末均分2‑6组，将每组油用牡丹种子粉末分别快速加入到相应的含有β‑巯基乙醇的700μL裂解液SL中，分别混匀，离心，得到各组上清液a；(3)将各组上清液a分别转移至相应的过滤柱CS，离心，得到各组上清液b；(4)将各组上清液b分别与无水乙醇混匀得到各组混合液，将各组混合液全部转移至同一吸附柱CR3中，离心；(5)采用去蛋白液RW1、DNase I工作液和漂洗液RW对吸附柱CR3分别进行处理后，离心，用RNase‑Free ddH₂O洗脱，得到总RNA溶液。