一种提取猪蛔虫受精卵基因组DNA的方法

摘要

一种高效提取猪蛔虫受精卵基因组DNA的方法，包括蒸馏水洗虫卵、预处理虫卵、蛋白酶K消化、除杂质、高纯水洗脱DNA等五个步骤。本发明提取的猪蛔虫受精卵基因组DNA，质量稳定，能有效地进行下游PCR扩增，为猪蛔虫的分子流行病学、遗传多样性、遗传结构、系统发生学、谱系地理学研究提供重要的技术方法，该发明对猪蛔虫病的分子诊断和防控也有重要意义。

主权项

一种高效提取猪蛔虫受精卵基因组DNA的方法，其特征是包括以下步骤：（1）蒸馏水洗虫卵：用离心管，加入蒸馏水和虫卵，3200rpm漩涡震荡1‑2min后，10000r/min离心2‑5min，弃上清液，如此反复3次；（2）预处理虫卵：将离心管于100℃沸水和‑80℃或液氮中交替放置lmin，经过6‑9次的反复充分冻融后，在离心管中加入研磨球后，水平放在漩涡震荡仪上3200rpm 震荡10‑15min，10000r/min离心30sec，转移上清液至1.5ml或2ml离心管中；（3）蛋白酶K消化：在上述离心管中加入核酸裂解液220μl，0.5M EDTA、pH8.0、50μl，蛋白酶K、50mg/ml、20μl，56℃恒温消化10‑12小时；（4）除杂质；（5）高纯水洗脱DNA。