一种用于胞内癌症标志物双重检测的卫星状纳米组装体的制备方法及应用

摘要

一种用于胞内癌症标志物双重检测的卫星状纳米组装体的制备方法及应用，属于材料化学技术领域。本发明包括：一、卫星状纳米组装体的制备：金纳米棒的合成、20 nm上转换纳米粒子的准备、金棒二聚体的组装，金棒二聚体上偶联拉曼信标分子DTTC，金棒二聚体核‑上转换卫星状结构的组装；二、胞内癌症标志物双重检测：金棒二聚体核‑上转换卫星状纳米组装体修饰穿膜肽，金棒二聚体核‑上转换卫星状纳米组装体胞内的检测，金棒二聚体核‑上转换卫星状纳米组装体胞内检测的表征，建立标准曲线等步骤实现。本发明提供了能够通过拉曼和荧光双重信号同时检测胞内miRNA21的含量和端粒酶的活性的方法，制备出了结构均一，生物相容性好的金棒二聚体核‑上转换卫星状纳米组装体。

主权项

一种卫星状纳米组装体用于胞内癌症标志物双重检测的方法，其特征在于步骤如下：（1）金纳米棒的合成：采用晶种生长法合成横向等离子吸收峰控制在800nm的金纳米棒GNR；（2）金棒二聚体的组装：将步骤（1）得到的金纳米棒GNR修饰巯基聚乙二醇SH‑PEG‑1000，离心重悬后再分别修饰含有microRNA21反义核苷酸序列的巯基DNA1及与DNA1部分互补的巯基DNA2序列，分别得到GNR‑DNA1及GNR‑DNA2复合体，再将两种复合物混匀，得到金棒二聚体；（3）金棒二聚体上偶联拉曼信标分子DTTC：将步骤（2）制备的金棒二聚体与拉曼信标分子3.3’‑二乙基硫醛三碳菁化碘DTTC混匀，8h后得到表面修饰有DTTC的金棒二聚体‑DTTC复合体；（4）金棒二聚体核‑上转换卫星状结构的组装：将步骤（3）得到的金棒二聚体‑DTTC离心重悬后，修饰端粒酶的引物TE primer序列，20nm上转换纳米颗粒上修饰与linker DNA部分互补的巯基mismatch DNA，通过linker DNA组装成金棒二聚体核‑上转换卫星状结构组装体，再将组装体通过梯度离心纯化；（5）金棒二聚体核‑上转换卫星状纳米组装体修饰穿膜肽：将步骤（4）得到的金棒二聚体核‑上转换卫星状结构组装体与SH‑PEG‑5000和穿膜肽TAT混匀，得到表面修饰有穿膜肽的金棒二聚体核‑上转换卫星状结构组装体；（6）金棒二聚体核‑上转换卫星状纳米组装体胞内的检测：将步骤（5）得到的金棒二聚体核‑上转换卫星状纳米组装体与细胞共孵育8h，当同时存在待测物miRNA21和端粒酶时，组装体的结构发生改变，金纳米棒和上转换纳米粒子从组装体上解离，分别引起拉曼和荧光信号的变化，进而进行检测；（7）金棒二聚体核‑上转换卫星状纳米组装体胞内检测表征：将步骤（6）得到的细胞同时进行拉曼光谱表征和荧光成像，并建立标准曲线。