一种虾青素十六碳二烯酸单酯的制备方法

摘要

本发明公开了一种虾青素十六碳二烯酸单酯的制备方法，包括以下步骤：步骤一、粗提液的制备：用天平称取5.0 g雨生红球藻藻粉，加入纤维素酶液，破壁，离心，弃上清后，丙酮浸提，再次离心后，弃去下层沉淀，制得粗提液；步骤二、溶剂系统的建立：按体积比4:1:2配制正己烷‑乙腈‑甲醇溶剂系统；步骤三、高速逆流色谱纯化：在474nm波长下采集数据，收集洗脱时间为31‑40min的目标成分，初步用TLC分析流出物，合并相同组分，制得化合物，即虾青素十六碳二烯酸单酯。本发明首次采用高速逆流色谱纯化法从雨生红球藻藻粉分离得到了虾青素十六碳二烯酸单酯，进一步采用HPLC和ESI‑MS技术鉴定纯化得到的化合物的结构，从而对后续虾青素酯的研究具有重大意义。

主权项

一种虾青素十六碳二烯酸单酯的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、粗提液的制备：用天平称取5.0 g雨生红球藻藻粉，加入浓度为0.5‑0.7 mg/mL的纤维素酶液200 mL，酶反应pH为4.0‑5.0，在45‑50 ^oC的条件下破壁25‑30 min，然后在5000 rpm条件下离心5 min，弃上清后，将500 mL的丙酮加入藻粉中，浸提40 min，再次离心后，弃去下层沉淀，制得粗提液；将所述粗提液浓缩蒸干，充氮，于‑20 ^oC条件下保存，备用；步骤二、溶剂系统的建立：按体积比4:1:2配制正己烷‑乙腈‑甲醇溶剂系统；分别按照上述比例配制溶剂系统溶液1500 mL，置于分液漏斗中，剧烈振荡充分混合后静置分层，平衡后将上下两相分开，以下相作为流动相，上相作为固定相，在使用前上下相分别超声脱气30 min；步骤三、高速逆流色谱纯化：打开泵，将超声脱气后的上相作为固定相以30 mL/min的流速泵入到高速逆流色谱仪中，直至上相充满整个HSCCC分离管中，暂停泵，将进液端放到流动相的试剂瓶中，打开主机的电源，设定转速850r/min，启动泵；在出液端用干净的量筒接液，在474nm波长下采集数据，收集洗脱时间为31‑40min的目标成分，初步用TLC分析流出物，合并相同组分，制得化合物，即虾青素十六碳二烯酸单酯。