量子点‑β‑HCG单抗偶联物的制备方法及其应用

摘要

本发明量子点‑β‑HCG单抗偶联物的制备方法及其应用，涉及纳米生物技术领域。量子点通过EDC等交联剂偶联β‑HCG单抗；采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质经电泳分离开后转移至PVDF膜，与量子点标记的β‑HCG单抗进行特异性结合，在紫外凝胶成像系统下即可得到免疫印迹结果图。本发明以量子点作为显色剂，偶联β‑HCG单抗，可以有效缩短免疫印迹时间并且提高准确度。

主权项

量子点‑β‑HCG单抗偶联物的制备方法及其应用，其特征在于按照下述步骤进行：（1）量子点偶联β‑HCG单抗偶联时，加入磷酸盐调节反应液pH，在巯基丙酸修饰的CdTe量子点中先加入1‑乙基‑3‑（3‑二甲基氨基丙基）碳化二亚胺（EDC）溶液活化反应10‑15 min，再加入NHS溶液反应10‑15 min，最后加入β‑HCG单抗于37℃反应2‑4 h；反应结束后，将得到的偶联物离心去沉淀，上清液经超滤离心管离心，并用磷酸缓冲液洗涤，最后浓缩后4℃保存；（2）基于量子点的免疫印迹法蛋白样品经过SDS‑PAGE电泳按分子量大小分离，转至PVDF膜后并封闭，用量子点标记的β‑HCG单抗做为一抗孵育，膜上目的蛋白即能与之进行特异性结合，最后采用紫外凝胶系统检测成像；蛋白经SDS‑PAGE电泳按分子量大小分离，再将PVDF膜于甲醇中激活，采用湿法转膜；将转好的膜放入5%脱脂牛奶中，震荡封闭1 h；用TBS溶液稀释成一系列浓度的量子点‑β‑HCG单抗偶联物，室温下孵育2 h；反应后直接将膜置于紫外凝胶系统中检测成像；观察荧光条带，并检测各条带荧光强度，得出线性关系。