一种野外分离中华散尾鬼笔子实体的方法

摘要

一种野外分离中华散尾鬼笔(Lysurus mokusin)子实体的方法，包括自制便携式超净工作台。其步骤为：自制便携式超净工作台消毒，手术刀、火柴、镊子、记号笔、PDA培养基消毒，放入便携式超净工作台；采集到子实体后在自制便携式超净工作台外消毒，后放入超净工作台，卡住卡扣密封；灭菌20min；双手从手套中伸入，点燃酒精盒，用手术刀横向切开头部与菌柄交界处的子实体，用镊子撕取一小块0.5cm左右的内层网状组织，接入PDA培养基，塞好棉塞。采集子实体的时间为夏末秋初，在落叶松林地被物上采集；最适取样部位为头部与菌病交界处；最适培养条件为25℃下避光培养；在培养的第15天满皿。用本发明能提高野外分离中华散尾鬼笔子实体的成功率；本发明能适用于野外分离真菌。

主权项

一种野外分离中华散尾鬼笔子实体的方法，其特征在于具体方法如下：(1)采集子实体前的准备工作：将自制便携式超净工作台用75％的酒精擦拭消毒；配制PDA培养基，在121℃高压蒸汽灭菌20min；将手术刀、火柴、镊子、记号笔、PDA培养基分别用75％的酒精擦拭消毒后放入便携式超净工作台，夹在C型管卡上；卡住卡扣密封。(2)夏末秋初携带自制便携式超净工作台进入林场，在落叶松林下地被物上采集中华散尾鬼笔进行分离。(3)采集到的中华散尾鬼笔子实体在自制便携式超净工作台外用浸有0.1％的升汞的棉球擦拭消毒，然后用锡纸包住，放入自制便携式超净工作台，卡住卡扣密封，打开紫外灯灭菌20min。关闭紫外灯，打开日光灯。双手从手套中伸入自制便携式超净工作台，点燃酒精盒，将手术刀从C型管卡上取下，在酒精盒火焰中来回几次，后横向切开头部与菌柄交界处的子实体，然后取下镊子在酒精盒火焰中来回几次，后撕取一小块0.5cm左右的内层网状组织，在火焰附近接入PDA培养基，然后将试管管口和棉塞在火焰中来回几次，塞好棉塞，用记号笔在试管外壁标记。把用过的手术刀和镊子在酒精盒火焰中来回几次，同记号笔和火柴一起，夹回C型管卡上。(4)分离完成后，熄灭酒精盒，打开自制便携式超净工作台，把接种好的真菌培养基和残留的中华散尾鬼笔子实体取出，用75％的酒精溶液擦拭自制便携式超净工作台，卡住卡扣密封，以备下一次分离操作使用。(5)接种好的培养基在25℃下避光培养15d至长满培养皿。