利用切割序列和间隔子的共振能量转移测定

摘要

分子构造物包含供体标记、受体标记、位于供体与受体之间的连接体肽、具有切割位点序列和(a)供体与切割位点序列和(b)受体与切割位点序列的至少一个之间的间隔子的连接体。优选，构造物选自CFP‑(SGLRSRA)‑SNAP‑25‑(SNS)‑YFP和CFP‑(SGLRSRA)‑小突触泡蛋白‑(SNS)‑YFP。在优选实施方案中，连接体肽是肉毒杆菌神经毒素的底物，其选自小突触泡蛋白(VAMP)、突触融合蛋白和SNAP‑25或其可被肉毒杆菌神经毒素识别和切割的片段。有利地，相对于无间隔子的构造物，间隔子增加了供体标记与受体标记之间的电子耦合。

主权项

一种遗传工程改造的细胞，其包括：表达载体，其编码一种构造物，所述构造物包含：定位成提供电子耦合的供体标记和受体标记，这样供体可通过偶极‑偶极耦合机制将能量转移至受体；置于供体与受体之间的连接体，其具有切割位点序列；供体与切割位点序列之间的第一间隔子；和受体与切割位点序列之间的第二间隔子；以及其中所述第一间隔子包含(GGGGS)n和(EAAAK)n之一，以及所述第二间隔子包含(GGGGS)n和(EAAAK)n之一，其中n是1至3，其中相对于相应的无间隔子的构造物，所述第一间隔子和第二间隔子提供提高的基于能量从供体标记转移至受体标记的测定灵敏性，且其中所述连接体包含SNARE蛋白、SNARE基序和SNARE突变蛋白之一。