一种原代小鼠或大鼠心肌细胞的分离培养方法

摘要

本发明公开了一种原代小鼠或大鼠心肌细胞的分离培养方法，采用特制的复合酶进行长期消化，使得获得细胞总量大，分离度高，活率高；由于采集方式的不同，杜绝了心脏内残留血液的污染和影响，使得本发明的方法获得的心肌细胞细菌、真菌和其他细胞的污染概率极低，同时还能够进行传代培养，为以心肌培养为基础的相关研究提供了良好的细胞培养解决方案。

主权项

一种原代小鼠或大鼠心肌细胞的分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：心脏的预处理清理离体的心脏，并利用含双抗和两性霉素B的D‑hanks溶液冲洗；步骤2：取心肌细胞使用活检针刺入步骤1处理后的心脏的左心室壁，切取心肌细胞；步骤3：酶消化将步骤2获得的心肌细胞置于复合酶消化液中消化，其中复合酶消化液中包括质量比为1:1:1:1的I型胶原酶、II型胶原酶、IV型胶原酶和Dispase酶；步骤4：分离培养心肌细胞将步骤3消化完毕的心肌细胞过70um筛网，进行离心洗涤，然后进行重悬并再次离心，最后用无血清培养液再次重悬，分离得到心肌细胞，使用含10％‑20％胎牛血清、2％双抗的培养基在37℃5％CO₂的培养箱中进行培养。