一种虹鳟传染性造血器官坏死病核酸疫苗及其应用

摘要

本发明涉及一种虹鳟传染性造血器官坏死病核酸疫苗及其应用，其制备方法包括以下步骤：(1)设计扩增J基因型传染性造血器官坏死病毒表面糖蛋白(Glycoprotein，G)基因的特异性引物对；(2)利用病毒敏感细胞系培养IHN病毒分离株，然后提取病毒基因组RNA；(3)采用步骤(1)所得引物对步骤(2)所得的病毒基因组RNA进行一步法RT‑PCR扩增，将RT‑PCR扩增产物经电泳后回收产物；(4)将步骤(3)所得的回收产物与pMD19‑T simple载体连接，将连接产物转化DH5α感受态细胞，挑取单菌落扩大培养后提取质粒并进行PCR鉴定，将鉴定正确的质粒进行测序；(5)将步骤(4)鉴定正确的IHNV病毒分离株糖蛋白G基因开放阅读框部分利用BamH I和Xho I酶切位点克隆到真核表达载体pcDNA3.1上，构建核酸疫苗。

主权项

一种中国虹鳟传染性造血器官坏死病核酸疫苗的制备方法，其包括以下步骤：(1)设计扩增J基因型传染性造血器官坏死病毒(IHNV)表面糖蛋白基因的特异性引物对F1和F2，或引物对F3和F4，或引物对F5和F6；其中(2)扩增IHNV分离株，然后提取病毒基因组RNA；(3)采用步骤(1)所得引物对步骤(2)所得的病毒基因组RNA进行一步法RT‑PCR扩增，将RT‑PCR扩增产物经电泳后回收产物；(4)将步骤(3)所得的回收产物与pMD19‑T simple载体连接，将连接产物转化DH5α感受态细胞，挑取单菌落扩大培养后提取质粒并进行PCR鉴定，将鉴定正确的质粒进行测序；(5)将步骤(4)鉴定正确的IHNV病毒分离株糖蛋白G基因开放阅读框部分利用BamH I和Xho I酶切位点克隆到真核表达载体pcDNA3.1上，构建核酸疫苗pGflank、pGleader或pG；其中，IHNV分离株的保藏编号为CCTCC No.V201622；优选地，特异性引物对选自F1和F2。