通过同源重组在人细胞中生产人突变蛋白

摘要

本发明涉及一种通过同源重组在真核细胞中生产真核多肽的突变蛋白的方法。本发明另外还涉及一种生产人细胞的方法，所述人细胞适合生产人突变蛋白。最后，本发明涉及通过所述方法生产的人细胞和可从其获得的突变的人蛋白质以及含这些突变蛋白的药物制剂。

主权项

生产真核多肽的突变蛋白的方法，其中(i)将一种能同源重组的核酸分子引入含编码内源性靶多肽的靶核酸序列的真核细胞，所述核酸分子包括：(a)两个侧翼序列，它们与靶基因座的区域是同源的，所述侧翼序列各自具有至少150bp的长度并且包含编码成熟靶多肽的靶基因座序列的区域，该序列与天然序列相比被修饰，以及(b)一段编码选择标记的核酸片段，(ii)将所述细胞在使得被引入的核酸分子发生同源重组的条件下培养，于是在同源重组后该细胞含有能表达靶多肽的突变蛋白的突变靶核酸序列，(iii)选择在其中发生了同源重组的细胞，以及(iv)从所述细胞或/和细胞上清液分离突变蛋白；其中另外，所述靶核酸序列的表达是通过引入异源表达控制序列而激活的。