一种向半滑舌鳎垂体细胞添加维生素 E 后提高促性腺激素表达水平的方法

摘要

本发明涉及一种向半滑舌鳎垂体细胞添加维生素E后提高促性腺激素表达水平的方法，步骤如下：(1)半滑舌鳎垂体细胞的分离与培养：首先配制L‑15细胞培养基，然后用所配培养基进行原代细胞的培养：(2)向半滑舌鳎垂体细胞中添加维生素E：配制维生素E溶液，向步骤(1)中所培养的细胞中添加维生素E，在添加后第四天进行样品收集；(3)向半滑舌鳎垂体细胞中添加维生素E后FSH和LH的定量PCR分析；取步骤(2)中的细胞沉淀进行RNA的提取及反转录，然后进行实时荧光定量PCR反应；(4)向半滑舌鳎垂体细胞中添加维生素E后FSH和LH的ELISA分析；以步骤(2)中收集的上清液为材料依次进行标准品的稀释与加样、加样、温育、配液、洗涤、加酶、温育、洗涤、显色、终止、测定。

主权项

一种向半滑舌鳎垂体细胞添加维生素E后提高促性腺激素表达水平的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)半滑舌鳎垂体细胞的分离与培养：首先取9.6克L‑15培养基和4.76克Hepes，充分溶解混匀4小时后，用NaOH调节pH值，然后抽滤，分装后进行保存；在加入胎牛血清、青霉素、链霉素以后，进行保存，最后用所配培养基将原代细胞在24℃的培养：(2)向半滑舌鳎垂体细胞中添加维生素E：配制低浓度为70μmol/ml和高浓度为210μmol/ml维生素E溶液，向步骤(1)中所培养的细胞中添加维生素E，在添加后第四天进行样品收集；(3)向半滑舌鳎垂体细胞中添加维生素E后FSH和LH的定量PCR分析：取步骤(2)中的细胞沉淀进行RNA的提取及反转录，然后进行实时荧光定量PCR反应；(4)向半滑舌鳎垂体细胞中添加维生素E后FSH和LH的ELISA分析：以步骤(2)中收集的上清液为材料依次进行标准品的稀释与加样、加样、温育30分钟、配液、洗涤、加酶标试剂50μl、温育、洗涤、显色15分钟、终止、测定。