| 主权项 |
植物mRNA直接提取方法，其特征在于：该提取方法按以下步骤进行：一、提取前的准备：依次用己烷、丙酮和乙醇溶液震动清洗皮内针，在75℃～82℃烘箱中干燥；然后把2片～4片载玻片叠放在一起，放到玻璃培养皿中，把干燥好的皮内针的针尖朝外悬在载玻片边上，盖上培养皿的盖子，放在75℃～82℃烘箱里，去掉培养皿的盖子，烘干，取出时盖上培养皿盖子，自然冷却；取0.1mL～0.3mL三甲氧基硅烷、0.7mL～0.9mL二甲苯和5μL～10μL的二异丙基乙胺置于离心管中，之后在混匀器上混合5s～10s，得混合液；然后取8uL～12uL混合液到PCR管里，使皮内针头部浸在混合液中，盖上PCR管的盖子；在混合液中孵化皮内针，75℃～82℃培养10h～16h；之后取出PCR管，待皮内针降到室温，吸出混合液弃掉，然后用焦碳酸二乙酯水清洗皮内针，清洗3～5次，清洗时针尖必须朝下，每次清洗5min～10min；二、耦合反应：将0.1M KOH溶液与0.1‑0.5μg/ml多聚胸腺嘧啶混合，然后加到装有皮内针的PCR管中；35℃～40℃保持5h～8h；取出皮内针并用45℃～55℃蒸馏水清洗；将皮内针放在载玻片上再置于培养皿中，盖上盖，放在空气中自然干燥；所述KOH溶液与多聚胸腺嘧啶的体积比为(95～100)：1；三、提取：将自然干燥后的皮内针扎入植物材料的目的基因检测部位保持1min～3min，拔出皮内针放到PCR管中，加8uL～12uL焦碳酸二乙酯水，盖上盖，漂放到水浴锅中，80℃～90℃保持8min～12min，使提取的mRNA溶入到焦碳酸二乙酯水中，即完成植物mRNA的提取。 |
