对生物样品中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测

摘要

本发明公开了鉴定样品中的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin‑resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的方法，其中该方法涉及在样品中检测金黄色葡萄球菌(S.aureus)特异性的核酸序列、mecA和mecC。还提供了用于确定样品中MRSA的存在的试剂盒。

主权项

一种用于在生物样品中确定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的存在或不存在的方法，其包括：(a)将所述生物样品与如下项接触：(i)在严格条件下与特异性针对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的靶核酸区段(如果存在的话)特异性地杂交的第一引物对，(ii)在严格条件下与靶mecA核酸区段(如果存在的话)特异性地杂交的第二引物对，和(iii)在严格条件下与靶mecC核酸区段(如果存在的话)特异性地杂交的第三引物对，以产生反应‑样品混合物，其中每个引物对的至少一个引物与荧光团标签相连，(b)使所述反应‑样品混合物处于实时聚合酶链式反应(PCR)条件，在该条件下所述生物样品中存在的每个靶核酸经扩增产生荧光信号，(c)测量每个荧光团产生的荧光信号的量，及(d)通过比较来自靶标志物核酸的荧光量，确定MRSA的存在或不存在，其中(i)当检测到金黄色葡萄球菌特异性靶核酸以及mecA和/或mecC核酸二者的荧光信号时，且(1)来自金黄色葡萄球菌特异性靶核酸的循环阈值(Ct)减去来自mecA和/或mecC核酸的Ct≤1.9，或(2)来自金黄色葡萄球菌特异性靶核酸的Ct减去来自mecA和/或mecC核酸的Ct>1.9且来自mecA和/或mecC核酸的Ct加1.9<来自金黄色葡萄球菌特异性靶核酸的Ct，则确定生物样品中存在MRSA；(ii)当检测到金黄色葡萄球菌特异性靶核酸及mecA和/或mecC核酸二者的Ct，且来自金黄色葡萄球菌特异性靶核酸的Ct减去来自mecA和/或mecC核酸的Ct<1.9，且来自金黄色葡萄球菌特异性靶核酸的Ct加1.9<来自mecA和/或mecC核酸的Ct时，确定生物样品中存在金黄色葡萄球菌和甲氧西林耐药性基因；或(iii)若检测到金黄色葡萄球菌特异性靶核酸序列的荧光信号但未检测到mecA和/或mecC的荧光信号，则在生物样品中确定存在金黄色葡萄球菌且确定不存在MRSA。