底物亲和力提高的脂肪酸AMP连接酶突变体及其应用

摘要

本发明涉及一种脂肪酸AMP连接酶突变体及其应用，属于生物工程领域。所述脂肪酸AMP连接酶来源于玫瑰孢链霉菌。所述突变体是将脂肪酸AMP连接酶的第296位的甘氨酸变为丙氨酸、第302位的异亮氨酸变为缬氨酸，分别得到突变体pAL296、pAL302。本发明所涉及的脂肪酸AMP连接酶突变体可提高与外源性前体癸酸的结合水平，从而提高达托霉素的产量。本发明中采用计算机模拟、重叠延伸PCR及定点突变技术在体外对脂肪酸AMP连接酶编码基因dptE进行定点突变，筛选出亲和力显著提高的突变体pAL296、pAL302，通过构建重组穿梭质粒pAK296、pAK302并将其依次导入玫瑰孢链霉菌，筛选接合子，获得脂肪酸AMP连接酶亲和力提高的玫瑰孢链霉菌DCE296、DCE302，为提高达托霉素的生产水平奠定基础。

主权项

两种脂肪酸AMP连接酶突变体，其特征在于，是对玫瑰孢链霉菌来源的脂肪酸AMP连接酶编码基因进行定点突变得到，是将脂肪酸AMP连接酶氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的的第296位的甘氨酸变为丙氨酸、302位的异亮氨酸变为缬氨酸，得到突变体pAL296、pAL302。