一种提取纯化波形蛋白的方法

摘要

本发明首次公开一种提取纯化波形蛋白的方法，解决了既有文献报道的波形蛋白提取工艺复杂、成本高、周期长的问题。本发明以猪眼晶状体为原料，经粗提、精提、分离、纯化和透析后制成冻干粉。在分离步骤中使用DEAE Sepharose FF柱进行一次性线性洗脱。本发明方法具有高效、低成本的特点，提取波形蛋白纯度高、相对回收率高。

主权项

一种波形蛋白的提取纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)粗提：解剖猪眼取晶状体，浸入粗提液后匀浆制得混悬液；将混悬液离心后弃上清液，取沉淀物重悬数次并离心；取沉淀物冻干制得粗提粉；(2)精提：用精提液溶解步骤(1)中的粗提粉，离心后弃沉淀，取上清液浓缩后得到精提物溶液；(3)分离：取精提物溶液上样到预平衡的DEAE Sepharose FF柱，先使用第一缓冲液洗脱大部分的42kDa杂蛋白，再使用第二缓冲液进行线性洗脱，收集线性洗脱的馏分；(4)纯化：对收集的馏分用10％SDS‑PAGE电泳，做Western‑Blot实验进行蛋白成分鉴定；合并53kDa目标波形蛋白含量达80wt％以上的馏分，经透析、冻干即得纯化Vim粉。