花叶山菅兰的组织培养方法

摘要

本发明涉及花叶山菅兰的组织培养方法，分别利用小芽诱导培养基进行芽诱导培养、增殖培养基进行增殖培养、壮苗培养基进行壮苗培养、生根培养基进行生根培养，然后进行炼苗与移栽获得花叶山菅兰植株。与现有技术相比，本发明通过组培技术，极大提高繁殖速度和苗的整齐度，更好地保持原有的母本性状，移栽成活率高达95％。

主权项

花叶山菅兰的组织培养方法，其特征在于，该方法采用以下步骤：(1)取花叶山菅兰从基部萌发的小芽，冲洗干净后依次用75v/v％的乙醇浸泡30s、1wt‰升汞浸泡15min、无菌水冲洗5‑6次，吸干表面水份后取小芽基部切成1cm长，接种于小芽诱导培养基上，该培养基上的营养成分为MS+6‑BA1.0‑5.0mg/L+NAA0.1‑0.5mg/L，控制培养温度为24‑30℃，光照为70‑100μmol/m²·s，进行芽诱导培养；(2)小芽接种于小芽诱导培养基上4周后开始膨大并出现黄绿色突起，2周后见明显的愈伤组织，继续培养1个月，切下带芽愈伤组织分别放入增殖培养基中，该培养基的营养成分为MS+6‑BA1.0‑3.0mg/L‑+NAA0.1‑0.3mg/L，控制培养温度为24‑30℃，光照为70‑100μmol/m²·s，进行增殖培养；(3)诱导出的丛生芽每丛有2‑3株伸长，其余处于矮化状态，分成小丛或单芽后放入壮苗培养基中，该培养基的营养成分为MS+6‑BA0.5‑2.0mg/L+NAA0.1‑0.2mg/L上，控制培养温度为24‑30℃，光照为70‑100μmol/m²·s，进行壮苗培养，不定芽迅速伸长，30天后长到2‑3cm；(4)取2‑3cm的小植株转接入生根培养基中诱导生根，该培养基的营养成分为MS+NAA0.1‑1.0mg/L，控制培养温度为24‑30℃，光照为70‑100μmol/m²·s，20天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后长至2‑3cm；(5)生根培养30天，根系长至1‑2cm，选择根系发达生长健壮的无菌苗,室内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即移栽室外。