用于在核酸测定中改善熔链分辨和多重性的探针

摘要

提供了用于检测和定量核酸的方法和组合物。在某些实施方案中，方法涉及采用包含与报告基团相连之非天然核苷酸的引物或探针。通过互补探针或引物的聚合来检测靶核酸，所述互补探针或引物整合与淬灭基团连接的同源非天然核苷酸。

主权项

用于检测靶核酸存在的体外方法，其包括：(a)将样品与第一探针组接触，所述探针组包含上游探针，其从5’至3’包含，(i)用报告基团‑淬灭基团对的第一成员标记的至少一个非天然核苷酸；(ii)标签序列；和(iii)与所述靶核酸第一链上的第一区域互补的序列；以及下游探针，其从5’至3’包含，(i)与所述上游探针的标签序列具有相同序列的镜像标签序列；和(ii)与所述靶核酸第一链上之位于所述第一区域下游的第二区域互补的序列，其中所述上游探针包含与所述下游探针互补的3个或更多个碱基的3’序列，以使得当与所述靶核酸杂交时，所述探针组形成T‑连接；(b)延伸所述上游探针以合成与所述下游探针上的镜像标签序列互补的序列，以形成延伸的上游探针；(c)使所述延伸的上游探针与其自身杂交以形成发夹探针；(d)在用报告基团‑淬灭基团对的第二成员标记的非天然核苷酸存在下，延伸所述发夹探针，所述非天然核苷酸能够与所述上游探针中的所述至少一个非天然核苷酸碱基配对；以及(e)通过检测所述上游探针和所述发夹探针上标记物的信号改变来检测所述靶核酸。