DNA甲基化转化效率的判断方法及其试剂盒和应用

摘要

本发明涉及一种DNA甲基化转化效率的判断方法，设置转化效率的目标值为η%；制备DNA样本，DNA样本经甲基化转化试剂盒处理后得到转化液,对照液由阳性甲基化质粒和DNA样本按照质量比为η%﹕1-η%配制而成；引物探针组X用于检测未转化DNA，引物探针组Y用于检测已转化的DNA；采用引物探针组X对所述转化液进行PCR检测，得到CT_X-M，采用引物探针组X对所述对照液进行PCR检测，得到CT_X-D；采用引物探针组Y对所述转化液进行PCR检测，得到CT_Y-M，采用引物探针组Y对所述对照液进行PCR检测，得到CT_Y-D；ΔΔCT= CT_X-M-CT_Y-M+CT_Y-D-CT_X-D；当ΔΔCT≥0时，DNA甲基化转化效率≥η%。本发明的DNA甲基化转化效率的判断方法可以快速判断样本DNA的亚硫酸盐处理转化率过高或过低。

主权项

一种DNA甲基化转化效率的判断方法，其特征在于：设置转化效率的目标值为η%；制备合格的DNA样本，所述DNA样本经甲基化转化试剂盒处理后得到转化液,制备对照液，所述对照液由阳性甲基化质粒和DNA样本按照质量比为η%﹕1‑η%配制而成；所述引物探针组X针对管家基因的序列设计且用于检测未转化DNA，所述引物探针组Y针对基因甲基化区域的目标序列设计且用于检测已转化的DNA；采用引物探针组X对所述转化液进行PCR检测，得到的扩增曲线CT值为CT_X‑M，采用引物探针组X对所述对照液进行PCR检测，得到的扩增曲线CT值为CT_X‑D；采用引物探针组Y对所述转化液进行PCR检测，得到的扩增曲线CT值为CT_Y‑M，采用引物探针组Y对所述对照液进行PCR检测，得到的扩增曲线CT值为CT_Y‑D；ΔΔCT= CT_X‑M ‑ CT_Y‑M + CT_Y‑D ‑ CT_X‑D；当ΔΔCT≥0时，DNA甲基化转化效率≥η%；当ΔΔCT＜0时，DNA甲基化转化效率＜η%。