一种用于检测溶菌酶的电化学生物传感器及其制备方法

摘要

本发明公开了一种用于检测溶菌酶的电化学生物传感器的制备方法，包括以下步骤：(1)设计一条报告探针DNA链S1；(2)将金电极预处理；(3)S1在缓冲液中打开二硫键，后将溶菌酶适体S2加入与S1形成双链DNA；(4)将处理好的金电极浸在双链DNA溶液中，将双链DNA修饰到金电极表面。本发明还公开了一种利用上述方法制备的电化学生物传感器以及该传感器在检测溶菌酶中的应用。将本发明得到的电极在三氯化六氨合钌检测液中浸泡，然后与甘汞参比电极和铂丝对比电极构成三电极系统，进行SWV检测。本发明首次将双电化学信号放大的策略结合免标记策略应用到溶菌酶的检测中来，实现高灵敏度地对溶菌酶进行检测。

主权项

一种利用电化学生物传感器检测溶菌酶的方法，其特征在于，检测步骤如下：(a)将该电化学传感器在三氯化六氨合钌检测液中浸泡，然后与甘汞参比电极和铂丝对比电极构成三电极系统，进行SWV检测，得到钌的峰电流I_0(RuHex)，二茂铁的峰电流为I_0(Fc)；(b)将该电化学生物传感器与不同浓度的溶菌酶进行识别后用SWV在三氯化六氨合钌检测液中检测，将得到的三氯化六氨合钌的峰电流与步骤(1)得到的I_0(RuHex)做差取绝对值得：|△I_RuHex|＝|I_RuHex‑I_0(RuHex)|，同样方法处理将得到|△I_Fc|；以|△I_RuHex|+|△I_Fc|对溶菌酶浓度做线性回归方程，得工作曲线；(c)在对实际样品进行检测时，采用同样方法对待测样品中的溶菌酶进行SWV检测，将得到两个峰电流分别与对应I₀做差、取绝对值、加和后代入线性回归方程即得样品中溶菌酶的浓度；其中，所述电化学生物传感器的制备步骤如下：(1)设计一条报告探针DNA链S1，所述DNA链S1与溶菌酶适体S2互补配对；S1链的3’端修饰有二茂铁标记物，S1链的5’端硫醇化；其中，报告探针S1的DNA链序列为：5’‑SH‑C6‑GTGCAGAGCTAAGTAACTCTGCAC‑Fc‑3’；适体S2的DNA链序列为：5’‑ATC AGG GCT AAA GAGTGC AGA GTT ACT TAG‑3’；(2)将金电极打磨抛光成镜面，再经二次蒸馏水超声清洗，干燥，得处理后的金电极；(3)报告探针S1在含有三(2‑羧乙基)膦的缓冲液中打开二硫键，后将溶菌酶适体S2加入与S1形成双链DNA；(4)将步骤(2)处理好的金电极浸在步骤(3)得到双链DNA溶液中，将双链DNA修饰到金电极表面，得电化学生物传感器。