一种高复苏率的冻存骨髓间充质干细胞复苏方法

摘要

本发明公开了一种高复苏率的冻存骨髓间充质干细胞复苏方法，属于干细胞复苏领域。本发明的一种高复苏率的冻存骨髓间充质干细胞复苏方法，包括将冻存液从液氮中取出，投入LNG中升温1min；将冻存液从LNG中取出，在真空状态下投入冰浴中，按照平均560℃/min的升温速率迅速降温至3.2~3.9℃等四个步骤。本发明的一种高复苏率的冻存骨髓间充质干细胞复苏方法具有对骨髓间充质干细胞低细胞毒性，在玻璃化冻存复苏过程中低细胞毒性损伤，低渗透性损伤，提高冻存细胞复苏率的特点。

主权项

一种高复苏率的冻存骨髓间充质干细胞复苏方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一：将冻存液从液氮中取出，投入LNG中升温1min；步骤二：将冻存液从LNG 中取出，在真空状态下投入冰浴中，按照平均560℃/min的升温速率迅速降温至3.2~3.9℃；步骤三：将冻存液倒入0.9%的盐水中，维持温度在3.2~3.9℃的条件下，在次声波振荡条件下加入20%的人血清白蛋白，0.8%~1%的单糖，0.8%~1.2%的非必需氨基酸，0.08%~0.12%的L‑谷氨酰胺，0.03%~0.04%的β‑巯基乙醇，调节体系的pH为6.8~7.6，加入1.5%的羟乙基哌嗪乙硫磺酸，继续在次声波条件下振荡30~45s；步骤四：将稀释后的冻存液在400r/min的条件下离心5min，去除上清液，向细胞沉淀中加入0.21%~0.23%的细胞生长因子，重新悬浮细胞。