焦磷酸测序法检测MTHFR基因分型的引物对及试剂盒

摘要

本发明涉及一种焦磷酸测序法检测MTHFR基因分型的引物对及试剂盒，属于体外核酸检测技术领域。所述引物对包括MTHFR C677T及MTHFR A1298C正向扩增引物、反向扩增引物、测序引物，所述MTHFR C677T正向扩增引物及所述MTHFR A1298C反向扩增引物的5’端分别进行生物素标记；所述试剂盒包括扩增引物、PCR反应液1、PCR反应液2、测序引物、尿嘧啶DNA糖基化酶及Taq聚合酶。本发明提供的所述试剂盒具有检测结果准确、特异性高、检测周期短、操作简单并能有效满足临床检验要求的优点。

主权项

一种焦磷酸测序法检测MTHFR基因分型的引物对，其特征在于，所述MTHFR基因检测的多态性位点为MTHFR C677T和/或MTHFR A1298C，所述引物对包括：(1)对于MTHFR C677T等位基因，扩增引物为：MTHFR C677T正向扩增引物：5’‑GCCAGCCTCTCCTGACTGTC‑3’；MTHFR C677T反向扩增引物：5’‑TCGGTGCATGCCTTCACA‑3’；MTHFR C677T测序引物：5’‑TGCGTGATGATGAAAT‑3’；其中，所述MTHFR C677T正向扩增引物的5’端进行生物素标记；(2)对于MTHFR A1298C等位基因，扩增引物为：MTHFR A1298C正向扩增引物：5’‑AGGAGCTGCTGAAGATGTGG‑3’；MTHFR A1298C反向扩增引物：5’‑CTCCCGAGAGGTAAAGAACGAA‑3’；MTHFR A1298C测序引物：5’‑AGGAGCTGACCAGTGA‑3’；其中，所述MTHFR A1298C反向扩增引物的5’端进行生物素标记。