基于双编码和单分子计数的细胞因子多重检测方法

摘要

本发明公开了一种基于双编码和单分子计数的细胞因子多重检测方法，将一抗固定在同一个玻璃基底上，通过抗原抗体的相互作用，分别固定目标物。同时，在磁纳米颗粒上修饰二抗和一级编码链，得到磁纳米探针。接着，利用二抗和抗原间的特异性结合作用，将磁纳米探针固定在基底上，形成三明治结构的免疫复合物。磁纳米探针上的一级条码链作为扩增单元触发多分枝的杂交链反应，生成带有多重分支的双链结构。该分支链即为二级编码链。最后，二级编码链与一种多分子标记的荧光探针结合，产生增强的荧光信号，通过清点荧光点的数目对目标物进行定量。该方法实现了细胞因子的多重、灵敏检测，两种目标物的检测限均为5fM。

主权项

一种基于双编码和单分子计数的细胞因子多重检测方法，其特征是：步骤如下：(1)将目标物的抗体固定在硅烷化的玻璃基底上；(2)将目标物和磁纳米探针依次加入到步骤(1)的玻璃基底上形成三明治式的免疫复合物，所述磁纳米探针通过将二抗和寡核苷酸修饰到streptavidin‑MNBs上制得，所述的寡核苷酸链作为一级条码链；(3)步骤(2)的一级条码链作为扩增原件触发多分枝的杂交链反应，产生带有多条分支的长双链结构；(4)步骤(3)的长双链结构作为二级条码链与多分子标记的荧光探针结合，产生荧光；(5)通过数点进行计数。