构建链特异性转录组文库的方法

摘要

本发明公开一种构建链特异性转录组文库的方法，包括：步骤1)mRNA片段化处理；步骤2)反转录：片段化的mRNA 3'端连接已知序列的R3接头；采用RT primer与R3接头退火配对进行反转录，合成cDNA第一链；步骤3)cDNA 3'端标记：去除RNA后，采用TdT对cDNA 3'端添加多个dC碱基，并采用ddCTP进行末端封闭，然后与F5G引物进行配对，在聚合酶作用下复制cDNA第一链；步骤4)PCR扩增；步骤5)质检。本发明的片段化mRNA先连接接头再合成，以提高cDNA合成效率、cDNA均一性；cDNA第一链合成后，采用TdT在其3'端添加多个dC碱基及ddCTP进行封闭，然后与含多个dG碱基的F5G引物配对，在聚合酶的作用下进行复制cDNA第一链，如此可有效降低自连二聚体的产生、提高文库均一性。

主权项

一种构建链特异性转录组文库的方法，该方法包括如下步骤：步骤1)mRNA片段化处理；步骤2)反转录：合成cDNA第一链；步骤3)cDNA 3'端标记：去除RNA后，采用TdT末端转移酶对cDNA 3'端添加多个dC碱基，并采用ddCTP进行末端封闭终止反应，然后与带5个G的第二链合成引物进行配对，在聚合酶作用下复制cDNA第一链；步骤4)PCR扩增。