桂圆益气补血汤及其制备方法和质量检测方法

摘要

一种桂圆益气补血汤，由以下原料制备而成：龙眼肉15～25g、黄芪15～25g、当归5～15g、山药10～20g和甘草3～9g；将原料与水按照料液比1:8～1:12，煎煮时间28～36min，连续煎煮两次或三次，即得桂圆益气补血汤；本发明还应用薄层色谱法建立黄芪、当归和甘草的薄层鉴别方法，采用高效液相色谱法对黄芪中主要有效成分黄芪甲苷和当归中主要有效成分阿魏酸进行含量测定。本发明配方具有益气补血，安神健脾，提高免疫力的功效；制备方法简单快捷，工艺稳定、合理；质量检测方法简便快捷，专属性强，结果可靠，能够作为桂圆益气补血汤的内控质量标准。

主权项

一种桂圆益气补血汤的质量检测方法，所述的桂圆益气补血汤由原料与水按照料液比1:8～1:12，煎煮时间28～36min，连续煎煮两次或三次，合并水煎液而得；所述的原料组成为：龙眼肉15～25g、黄芪15～25g、当归5～15g、山药10～20g和甘草3～9g；其特征在于，所述的质量检测方法应用薄层色谱法建立黄芪、当归和甘草的薄层鉴别方法，采用高效液相色谱法对黄芪中主要有效成分黄芪甲苷和当归中主要有效成分阿魏酸进行含量测定，具体步骤如下：(1)黄芪薄层色谱鉴别：将按原料比例制备好的桂圆益气补血汤浓缩至50ml，取其中10ml，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨水洗涤2次，每次20ml，弃去氨水，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；按原料比例和供试品溶液的制备方法制成缺黄芪阴性对照品溶液和黄芪单味药溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.259mg的黄芪甲苷对照品溶液；依照薄层色谱法试验，分别吸取上述4种溶液各5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿：甲醇：水为13：7：2的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，分别在日光和365nm紫外光灯下检视；(2)当归薄层色谱鉴别：将按原料比例煎煮的桂圆益气补血汤浓缩至50ml，取其中20ml，用0.5mol/l硫酸酸化至pH1～2，置分液漏斗中，再用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并提取液，挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；按原料比例和供试品溶液的制备方法制成缺当归阴性对照品溶液和当归单味药溶液；另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.261mg的阿魏酸对照品溶液；照薄层色谱法分别吸取上述4种溶液各5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷：乙酸乙酯：甲酸为4：3：0.1的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，在日光下检视；(3)甘草薄层色谱鉴别：将按原料比例煎煮的桂圆益气补血汤浓缩至50ml，取其中10ml，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；按原料比例和供试品溶液的制备方法制成缺甘草阴性对照品溶液和甘草单味药溶液；再取甘草酸单铵盐对照品，加甲醇制成每lml含0.345mg的溶液，作为甘草酸单铵盐对照品溶液；照薄层色谱法试验，分别吸取上述4种溶液各5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：甲酸：冰醋酸：水为15：1：1：1的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置365nm的紫外光灯下检视；(4)阿魏酸的含量测定，具体按照以下步骤A～步骤G进行：A、色谱条件：色谱柱：Phenomenex Luna C₁₈柱，250×4.6mm，5μm；流动相：体积比60：40的甲醇‑0.05％磷酸溶液；流速：0.8ml·min^‑1；检测波长：320nm；柱温：30℃；进样量：20μl；理论塔板数按阿魏酸峰计算应不低于5000；B、溶液制备：供试品溶液的制备：将按1/2原料量煎煮的桂圆益气补血汤浓缩至50ml，置100ml容量瓶中，加70％甲醇至刻度，称定重量，超声10min，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，精密移取10.00ml至250ml容量瓶中，加70％甲醇至刻度，摇匀，静置，取上清液滤过，即得；阿魏酸对照品溶液的制备：精密称取阿魏酸对照品0.55mg，置250ml容量瓶中，加入70％甲醇使其溶解，并稀释至刻度，摇匀即得每1ml含阿魏酸2.2μg对照品溶液；阴性样品溶液的制备：按原料比例和制备方法，制成不含当归药材的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性样品溶液；C、专属性试验：按照步骤A所述的色谱条件，精密吸取阿魏酸对照品溶液、供试品溶液、和阴性样品溶液各20μl进行色谱测定；D、线性关系考察：分别精密吸取上述阿魏酸对照品溶液2μl、4μl、6μl、8μl、10μl、12μl、14μl、16μl和18μl进行色谱测定，按步骤A所述的色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值A为横坐标、阿魏酸的进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程；E、精密度试验：精密吸取供试品溶液，进样20μl，重复进样5次，测定阿魏酸峰面积；F、重复性试验：取同一批样品，按步骤B方法平行制备5份供试品溶液，分别进行测定，计算阿魏酸含量；G、稳定性试验：精密吸取供试品溶液20μl，分别于配制后0h、1h、2h、6h、12h和24h，依次测定，计算阿魏酸含量；(5)黄芪甲苷的含量测定：具体按照以下步骤a～步骤g进行：a、色谱条件：色谱柱：Phenomenex Luna C₁₈柱，250×4.6mm，5μm；流动相：体积比为33:67乙腈‑水溶液；流速：1ml·min^‑1；检测波长：203nm；柱温：35℃；进样量：10μl；理论塔板数按黄芪甲苷峰计算应不低于3000；b、溶液制备：供试品溶液的制备：将按1/2原料量煎煮的桂圆益气补血汤浓缩至50ml，精密量取20ml，用水饱和的正丁醇液提取5次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨水洗涤2次，每次25ml，弃去氨水液，正丁醇液蒸干；残渣用10ml甲醇溶解，即得；黄芪甲苷对照品溶液的制备：精密称取黄芪甲苷对照品2.59mg，置10ml容量瓶中，加入甲醇使其溶解，并稀释至刻度，摇匀即得每1ml含黄芪甲苷0.259mg对照品溶液；阴性样品溶液的制备：按原料比例和制备方法，制成不含黄芪药材的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性样品溶液；c、专属性试验：按照步骤a所述的色谱条件，精密吸取黄芪甲苷对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10μl进行色谱测定；d、线性关系考察：分别精密吸取黄芪甲苷对照品溶液6μl、10μl、14μl、18μl、22μl和26μl进行色谱测定，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值A为横坐标、黄芪甲苷的进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程；e、精密度试验：精密吸取供试品溶液，进样10μl，重复进样5次，测定黄芪甲苷峰面积；f、重复性试验：取同一批样品，按步骤b方法平行制备5份供试品溶液，分别进行测定，计算黄芪甲苷含量；g、稳定性试验：精密吸取供试品溶液10μl，分别于配制后0h、1h、2h、6h、12h和24h，依次测定，计算黄芪甲苷含量。