人Tafazzin蛋白的生产工艺方法

摘要

本发明公开了一种人Tafazzin蛋白的生产工艺方法，其特点是以tafazzin全长基因的质粒为模板，经PCR扩增tafazzin基因，经菌液PCR与基因测序结果鉴定，成功构建pEASY-E1-tafazzin原核表达载体。为筛选高效表达菌株，将鉴定正确的重组质粒pEASY-E1-tafazzin分别转化BL21、BL21pLysS、Transetta三种表达感受态细胞，SDS-PAGE电泳表明Transetta菌株Tafazzin蛋白表达量相对最高。本发明构建tafazzin全长基因的原核表达载体并诱导其重组蛋白表达，从而为tafazzin的纯化、抗血清的制备及tafazzin蛋白与CL代谢机制研究奠定了基础，进而为CL代谢异常疾病的治疗提供理论依据。

主权项

一种人Tafazzin蛋白的生产工艺方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、Tafazzin基因的扩增：以tafazzin全长基因的质粒为模板，经PCR扩增tafazzin基因；S2、pEASY‑E1‑tafazzin质粒表达载体的构建及验证：经菌液PCR与基因测序结果鉴定，构建pEASY‑E1‑tafazzin原核表达载体；S3、高表达宿主菌筛选：将鉴定正确的重组质粒pEASY‑E1‑tafazzin分别转化BL21、BL21pLysS、Transetta三种表达感受态细胞，SDS‑PAGE电泳表明Transetta菌株Tafazzin蛋白表达量相对最高，取其作为后期研究的重组菌，进行大量培养，将带有pEASY‑E1‑tafazzin质粒的菌液分成至少6份的1ml菌液，分别向其中加入终浓度为0～1mmol/L的IPTG；S4、将带有pEASY‑E1‑tafazzin质粒的菌液，经IPTG 35‑37℃或15‑17℃诱导后收集菌液，分别取全菌蛋白样品、上清可溶蛋白样品和沉淀蛋白样品，通过SDS‑PAGE电泳对tafazzin蛋白小量诱导表达条件进行摸索并对其可溶性进行分析；S5、Tafazzin蛋白western blotting鉴定。