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一种测定在含有白细胞的样品中信号转导途径信号蛋白的激活状态的方法，用于评估核糖体S6蛋白通路激活的推定的激酶抑制剂的效力，包括：a)将样品中的白细胞群暴露于推定的ERK激酶抑制剂或PI3K激酶抑制剂；b)将样品中的白细胞暴露于已知的ERK抑制剂或PI3K抑制剂，其中，当所述推定的抑制剂是PI3K抑制剂时，所述已知的抑制剂是ERK抑制剂；当所述推定的抑制剂是ERK抑制剂时，所述已知的抑制剂是PI3K抑制剂；其中，ERK和PI3K同时被抑制对于完全抑制脂多糖诱导的核糖体S6蛋白通路的激活是必需的；c)将含有白细胞的样品暴露于脂多糖，以激活该样品的白细胞中的至少一种核糖体S6信号转导途径中的可激活蛋白；d)用保存剂保存激活后的样品；e)将所述样品中被保存白细胞的胞内表位解掩蔽；f)使被保存的白细胞中解掩蔽的胞内表位与经荧光标记的对所述可激活蛋白的激活位点具有特异性的捕捉分子相接触；g)检测由于所述捕捉分子结合至解掩蔽胞内表位的激活态而捕捉到的被保存、被激活的白细胞群的平均荧光强度；h)将暴露于推定的激酶抑制剂、且被保存、被激活的白细胞群测得的平均荧光强度与未暴露于推定的激酶抑制剂，但进行了步骤b)至g)的平行对照白细胞样品所测得的荧光进行比较，其中，如果暴露于推定的激酶抑制剂的细胞群测得的荧光相对于未暴露于推定的激酶抑制剂的细胞群降低，则所述推定的激酶抑制剂被评估为核糖体S6蛋白通路激活的有效激酶抑制剂。 |
