发明名称 |
一种水稻种胚RNA的提取方法 |
摘要 |
本发明涉及一种提取水稻种胚RNA的方法,包括如下步骤:剥取10粒种胚装入EP管中,立即加入200ulTripure,用尖头玻璃棒快速捅碎,加入800ulTripure,迅速颠倒30s以上,室温静置10min;加入200ul的氯仿,颠倒混匀,室温静置10min;4℃12000g离心10min,吸取上清约450ul加入等量冰异丙醇,轻轻颠倒混匀,室温静置10min;4℃12000g离心15min,弃上清并加入1ml75%乙醇,轻轻吹打沉淀,使之飘起,4℃12000g离心3min,弃上清;重复前述步骤;将空管12000g离心2min,吸干余液,放置大约30s,立即加入30-60ulRNase-freewater,轻轻吹打数次,使沉淀溶解,随后水浴65℃5min。该方法提取的水稻种胚RNA具有得率高、完整性好等优点。 |
申请公布号 |
CN105316316A |
申请公布日期 |
2016.02.10 |
申请号 |
CN201410379838.6 |
申请日期 |
2014.08.05 |
申请人 |
张建福;谢华安;魏毅东 |
发明人 |
张建福;谢华安;魏毅东 |
分类号 |
C12N15/10(2006.01)I |
主分类号 |
C12N15/10(2006.01)I |
代理机构 |
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代理人 |
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主权项 |
一种水稻种胚RNA的提取方法,步骤如下:(1) 将10粒种子剥胚,将胚装入EP管中,立即加入200ul Tripure,用尖头玻璃棒快速捅碎,加入800ul Tripure,迅速快速颠倒振荡30s以上,室温静置10min ;(2) 加入200ul的氯仿,颠倒振荡使两相充分混合,室温静置10min;(3) 4 ℃ 12000g离心10min,吸取上清约450ul加入等量冰异丙醇,轻轻颠倒振荡充分混合,室温静置10min ;(4) 4℃ 12000g离心15min,弃上清并加入1ml 75%乙醇,轻轻吹打沉淀,使之飘起,4℃ 12000g离心3min,弃上清;(5) 重复 (4),500ul乙醇即可;(6) 将空管12000g离心2min,吸干余液,放置大约30s,立即加入30‑60ul RNase‑free water,轻轻吹打数次,使沉淀溶解,随后水浴65℃ 5min使其充分溶解并打开二级结构;(7) 如果RNA不立即使用,步骤6加入乙醇后,放置-20℃保存,待用时,取出4℃ 离心后弃上清进行步骤6;(8) 溶解的RNA最好立即测定OD,用1xTBE配制1% 琼脂糖电泳220v 11min跑电泳,操作必需在冰上进行,RNA可保存在-20℃短期保存或‑80℃长期保存,如果RNA重新冻融必须吹打混匀后进行后续实验。 |
地址 |
350003 福建省福州市五四北路247号福建省农业科学院高新技术大楼7层 |