一种同时鉴定山羊、绵羊、猪和鸭肉源性的荧光标记基因复合扩增方法

摘要

本发明提供了一种同时检测山羊、绵羊、猪和鸭肉等四种肉类源性的荧光标记基因复合扩增技术。本发明的方法是以上述四种动物的线粒体16S rRNA和Cyt b基因为目的基因，采用2对荧光标记的引物对4种动物的16S rRNA和Cyt b基因进行PCR复合扩增。PCR扩增产物经3730xl全自动基因分析仪检测，根据16SrRNA基因扩增片段长度多态性进行种属鉴定。本发明提供的方法弥补了上述4种肉类检测方法的空白。

主权项

一种同时鉴定山羊、绵羊、猪和鸭肉等4种肉类源性的荧光标记基因复合扩增方法，其特征在于，以山羊、绵羊、猪和鸭的线粒体16S rRNA和cyt b基因为目的基因，采用一对荧光标记检测引物对所述4种动物的mtDNA 16S rRNA进行PCR扩增，同时用一对扩增上述物种cyt b基因的荧光标记通用引物作为内参引物，PCR扩增产物经ABI 3730xl全自动基因分析仪检测，根据16S rRNA基因扩增片段长度多态性进行种属鉴定；其中，所述的检测引物为：SIM‑F：5’‑FAM‑AAGACGAGAAGACCCTTGGACTTTA‑3’，SIM‑R：5’‑GATTGCGCTGTTATCCCTAGGGTA‑3’；所述的内参引物为：mcb‑F：5’‑FAM‑TACCATGAGGACAAATATCATTCTG‑3’mcb‑R：5’‑CCTCCTAGTTTGTTAGGGATTGATCG‑3’；所述PCR扩增的反应体系包含：2.5mmol/L dNTP3μL，5×PCR Buffer 2.5μL，10μmol/L的线粒体16S rRNA通用引物各1μL，10μmol/L的cyt B通用引物各1μL，Taq酶0.4μL，DNA模板3μL；所述PCR扩增的反应条件为：94℃3min，30个循环的94℃30s、55℃30s、72℃45s，72℃20min。