一种藻体中腐殖酸大孔径树脂分级方法

摘要

本发明公开了一种藻体中腐殖酸大孔径树脂分级方法，所述分级提取方法包括如下步骤：藻体预处理、藻体索氏提取、藻体的氯化钙处理、藻体的碳酸钠处理、藻体的碱液提取、藻体腐殖酸除硅、藻体腐殖酸除富里酸、藻体腐殖酸的亚组分分级、藻体腐殖酸亚组分除盐及固化。通过上述方式，本发明能够从褐藻生物体中提取腐殖酸，并利用XAD-8树脂分离技术进行亚组分分离，最终得到分级的藻体腐殖酸亚组分。

主权项

一种藻体中腐殖酸大孔径树脂分级方法，其特征在于，所述分级提取方法包括如下步骤：步骤a、藻体预处理：取风干后的藻体，剔除杂物，在30‑50^oC下烘干，碾磨后过筛，得到藻体粉末；步骤b、藻体索氏提取：将藻体粉末置于索式提取器中，依次用乙醚、丙酮、95%乙醇、二氧杂环己烷作为提取液进行索提；索提过程中，当采用其中一种索提液索提时，则每隔5h，在220nm波长的紫外可见光下测定索提液的吸光度，当测得的索提液的吸光度大于或等于0.01时，则继续该索提过程；当测得的吸光度小于0.01时，更换下一个索提液进行索提；步骤c、藻体的氯化钙处理：向去离子水索提藻体中加入氯化钙溶液，使固液比达到1：10，在40‑70^oC条件下连续搅拌10‑40 min后，离心弃去上层清液，得到氯化钙处理藻体1；向氯化钙处理藻体1中加入氯化钙溶液，使固液比达到1：10，在40‑70^oC条件下连续搅拌10‑40 min后，离心弃去上层清液，得到氯化钙处理藻体2；向氯化钙处理藻体2中加入去离子水，使固液比达到1：10，连续搅拌10‑60 min后，离心弃去上层清液，得到去离子水处理藻体；向去离子水处理藻体中加入盐酸，使固液比达到1：10，连续搅拌10 ‑60 min后，离心弃去上层清液，得到盐酸处理藻体1；向盐酸处理藻体1中加入盐酸，使固液比达到1：10，连续搅拌10‑60 min后，离心弃去上层清液，得到盐酸处理藻体2；向盐酸处理藻体2中加入盐酸，使固液比达到1：10，连续搅拌10 ‑60 min后，离心弃去上层清液，得到盐酸处理藻体3；向盐酸处理藻体3中加入去离子水，使固液比达到1：10，连续搅拌10 min后，离心弃去上层清液，得到水洗盐酸处理藻体；步骤d、藻体的碳酸钠处理：向水洗盐酸处理藻体中加入碳酸钠溶液，使固液比达到1：10，在40‑70^oC条件下连续搅拌30‑60 min后后，离心所得固体标记为碳酸钠处理藻体1；向碳酸钠处理藻体1中加入碳酸钠溶液，使固液比达到1：10，在40‑70^oC条件下连续搅拌30‑60 min后，离心所得固体标记为碳酸钠处理藻体2；向碳酸钠处理藻体2中加入去离子水，使固液比达到1：10，连续搅拌10 ‑60 min后，离心所得固体标记为水洗碳酸钠处理藻体；步骤e、藻体的碱液提取：氮气保护条件下，向水洗碳酸钠处理藻体中加入氢氧化钠和焦磷酸钠，并用去离子水稀释，使溶液中氢氧化钠和焦磷酸钠的浓度均为0.1mol/L，且溶液中固液比为1:10，搅拌溶液4‑6 h，静置20‑28 h后，离心得到上层清液1和藻体残渣1；氮气保护条件下，向上层清液1中加入6mol/L 盐酸，使溶液pH =1.0，搅拌30‑60 min，静置20‑28h后，离心得固体标记为腐殖酸1；氮气保护条件下，向藻体残渣1中加入氢氧化钠和焦磷酸钠，并用去离子水稀释，使溶液中氢氧化钠和焦磷酸钠的浓度均为0.1 mol/L，且溶液中固液比为1:10，搅拌4‑6 h，静置20‑28 h后，离心得到上层清液2和藻体残渣2；氮气保护条件下，向上层清液2中加入6mol/L 盐酸，使其pH =1.0，搅拌30‑60 min，静置20‑28 h后，离心得固体标记标记为腐殖酸2；将腐殖酸1和腐殖酸2合并，标记为粗提腐殖酸；步骤f、藻体腐殖酸除硅：氮气保护条件下，用含有0.1mol/L氢氧化钠和0.3mol/L氯化钠的溶液将步骤e中的粗提腐殖酸溶解，使其浓度为1‑2 g/L，搅拌30 ‑60 min，高速离心分离，得到上层清液3；将上层清液3用6 mol/L盐酸酸化至pH=1.0，再加入浓氢氟酸，使氢氟酸浓度为0.3mol/L，持续搅拌4‑6 h，静置20‑28h后，高速离心分离得固体标记为无硅腐殖酸；步骤g、藻体腐殖酸除富里酸：向步骤f中的无硅腐殖酸中加入0.1mol/L 盐酸溶液，使其固液比为1:10，持续搅拌4‑6h，并静置20‑28 h后，离心得到上层清液4及纯化腐殖酸；步骤h、藻体腐殖酸的亚组分分级：在氮气保护条件下，用氢氧化钠将步骤g中的纯化腐殖酸溶解，加入去离子水使溶液中的腐殖酸浓度在1‑2 g/L，用盐酸和氢氧化钠调节溶液pH=2后，以15倍柱体积/h的速度流过XAD‑8树脂柱，流出液弃去；以5柱体积/h的速度，依次用pH=3、pH=5和pH=7的0.1mol/L焦磷酸钠缓冲液淋洗XAD‑8树脂柱，分别收集流出液并立即酸化至pH=1，搅拌4 h后，离心得到固体三份分别标记为粗提藻体腐殖酸亚组分1、粗提藻体腐殖酸亚组分2、粗提藻体腐殖酸亚组分3；在氮气保护下，以5柱体积/h的速度，依次用pH=9、pH=11和pH=13的0.1mol/L焦磷酸钠缓冲液淋洗XAD‑8树脂柱，分别收集流出液并立即酸化至pH=1，搅拌4 h后，离心得到固体三份分别标记为粗提藻体腐殖酸亚组分4、粗提藻体腐殖酸亚组分5、粗提藻体腐殖酸亚组分6；步骤i、藻体腐殖酸亚组分除盐及固化：在氮气保护下，用0.1 mol/L的氢氧化钠分别溶解粗提藻体腐殖酸亚组分1至粗提藻体腐殖酸亚组分6，用盐酸调节每份溶解液的pH=5‑9，并使每份溶解液的固液比均为1:2，共计得到六份腐殖酸亚组分溶液；将六份腐殖酸亚组分溶液分别置入6个7000道尔顿透析袋，并将每个透析袋置于超纯水中，组成透析体系，搅拌12 h，盐分通过透析袋进入超纯水，将每个透析袋中的腐殖酸亚组分溶液冷冻干燥得到六份腐殖酸亚组分固体，命名为藻体腐殖酸亚组分1、藻体腐殖酸亚组分2、藻体腐殖酸亚组分3、藻体腐殖酸亚组分4、藻体腐殖酸亚组分5、藻体腐殖酸亚组分6。