转基因玉米BT176双重数字PCR荧光定量检测方法

摘要

本发明提供一种针对转基因玉米BT176的双重数字PCR荧光定量检测方法，本方法可以直接对待检测样品的基因组中的转基因玉米BT176进行定量检测，从而省去了常规PCR方法定量检测中标准曲线绘制步骤以及现有数字PCR检测中的样品前处理步骤，另外，在本方法中，由于转基因成分是通过外源基因拷贝数与内参基因拷贝数的比例计算得到的，因此在同一个反应体系进行双重检测可以提高转基因成分定量检测的稳定性。利用本方法可实现对转基因玉米BT176的绝对定量检测，定量检测限可达到0.5％，灵敏度可达到0.1％，能够满足所有转基因成分实际检测的需要。此外，本方法操作简单，灵活性强，是一种转基因绝对定量检测的有效方法。

主权项

用于转基因玉米BT176双重数字PCR荧光定量检测的引物和探针组合，其特征在于，所述引物和探针组合为：外源基因正向引物：5'‑GGCCGTGAACGAGCTGTT‑3'外源基因反向引物：5'‑GGGAAGAAGCCTACATGTTTTCTAA‑3'外源基因探针：5'‑FAM‑AGCAACCAGATCGGCCGACACC‑BHQ1‑3'内参基因adh1‑135正向引物：5'‑CGTCGTTTCCCATCTCTTCCTCC‑3'内参基因adh1‑135反向引物：5'‑CCACTCCGAGACCCTCAGTC‑3'内参基因adh1‑135探针：5'‑VIC‑AATCAGGGCTCATTTTCTCGCTCCTCA‑BHQ1‑3'。