一种响应面优化高纯度茼蒿总黄酮的提取纯化工艺

摘要

本发明涉及一种响应面优化高纯度茼蒿总黄酮的提取纯化方法包括如下步骤：超声波辅助法对茼蒿总黄酮进行粗提，双水相萃取法分离茼蒿总黄酮，利用响应面优化方法对大孔树脂分离纯化茼蒿总黄酮进行优化，得到含量高的茼蒿总黄酮。本发明针对茼蒿本身，采用超声波辅助提取，双水相萃取的工艺，使茼蒿总黄酮的提取率变高，其他非黄酮成分的提取率变低，并且可以用大孔树脂进行分离纯化，具备操作工艺简单、成本低、易操作的特点。

主权项

一种响应面优化高纯度茼蒿总黄酮的提取纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一：茼蒿总黄酮的粗提选取茼蒿，粉碎，称取茼蒿粉末，按1:30‑35( g:mL)料液比，加入提取剂体积分数为60%‑70%的乙醇溶液，20‑30℃下，对混合液在80khz 200W条件下超声波处理50‑70min，置于60℃恒温水浴锅中浸提0.5‑1.5h，离心，取上清液，得到粗提液；步骤二：双水相萃取将步骤一得到的粗提液，加入C₂H₅OH‑(NH₄)₂SO₄形成的双水相体系，所述C₂H₅OH的质量分数为20%‑28%，所述(NH₄)₂SO₄的质量分数为16%‑24%，加入质量分数为1.5%‑3%的NaCl，加入质量分数为0.3‑0.5%的羟丙基‑β‑环糊精，调节pH值为6‑8，混匀，分相；取出富含茼蒿总黄酮的乙醇上相，进行减压蒸馏、浓缩溶液，得到0.25‑2.00mg/ml不同质量浓度的茼蒿黄酮乙醇提取液；步骤三：茼蒿总黄酮的纯化(1)大孔吸附树脂预处理(2)大孔吸附树脂分离纯化将步骤二得到的0.25‑2.00mg/ml不同质量浓度的茼蒿黄酮乙醇提取液，用酸或碱调至4‑9的不同pH值，加入到D‑101大孔树脂柱中，用55%‑95%不同的体积分数的洗脱剂乙醇以1. 0‑5.0mL/min的不同的流速进行洗脱，对洗脱液进行浓缩，得到提取液；(3)用吸光光度法测定总黄酮含量步骤(2)得到的吸取提取液1mL，用70%乙醇补至5mL，加入浓度为5%NaN0₂ 0.3mL，摇匀置6min;再加入浓度为10%A1(NO₃)₃ 0.3mL，摇匀置6min；加浓度为4%NaOH4mL，用蒸馏水定容至l0mL，摇匀15min后测定吸光度，根据吸光度（Y）和浓度（X）的回归方程：y=9.12x‑0.023，R²=0.9986，计算浓度；(4)实验设计与统计分析a单因素试验依次改变上样浓度、上样pH、洗脱剂浓度、流速进行单因素试验，用步骤(3)中吸光光度法测定所得的茼蒿总黄酮提取液中的总黄酮的浓度；b响应面法优化设计根据单因素试验结果，选择上样浓度、上样pH、洗脱剂浓度、流速四个因素，利用Design‑Expert软件根据Box‑Benhnken设计原则进行实验设计，以样浓度A、上样pH B、洗脱剂浓度C、洗脱流速D为自变量，以TFCL回收率为响应值Y，建立多元二次方程：Y=63.31‑0.72A‑0.83B‑0.14C‑0.072D‑0.71AB‑0.053AC‑0.7AD‑0.41BC+0.54BD‑0.21CD‑2.500E‑0.78A²‑0.53B²‑2.22C²‑0.71D²(5)实验结果分析与优化利用Design‑Expert软件根据多元二次回归方程进行绘图分析，得到回归方程的响应面及其等高线图。