一种基于核碱基信息的微藻群落原位生长速率的测定方法

摘要

本发明涉及一种基于核碱基信息的微藻群落原位生长速率的测定方法。选择若干水华优势藻，获取不同实验条件下指数生长期的生长速率；收集各种条件下指数生长期内生长速率最大时的藻细胞样品，进行盐酸高温消解处理，用高效液相色谱分析特定的核碱基含量。将藻细胞中的尿嘧啶含量与胸腺嘧啶含量的比值对藻类最大生长速率作图，并建立回归模型；从野外环境中采集微藻细胞，用于核碱基含量分析，计算微藻细胞的[U]/[T]比值，利用已建立的回归模型反演出野外环境中的藻类生长速率，即微藻群落原位生长速率。本方法所得生长速率基本上反映了野外取样时刻的藻类群落生长特性，非常适于探索微藻群落原位生长速率的高分辨率时空变化特征，进而为预测藻类水华可能的暴发位置和时间提供科技支撑。

主权项

一种基于核碱基信息的微藻群落原位生长速率的测定方法，其特征在于包括以下步骤：(1) 藻类生长速率的测定，在实验室不同温度或光照条件下开展藻类的系列培养实验，通过测定藻类的细胞密度或叶绿素a含量绘制生长曲线，计算各处理组藻类瞬时生长速率（r，d^‑1），在死亡率为零的指数生长期内，r等于其比生长速率（μ，d^‑1）；(2) 藻细胞的酸消解及特定的核碱基含量比的测定，所述特定的核碱基为尿嘧啶（U）和胸腺嘧啶（T），在藻类的指数生长期，采集水样进行微孔膜过滤得微藻细胞样品或者用浮游植物网获取微藻细胞浓缩液，置于安瓿瓶中并添加盐酸，控制盐酸最终浓度为6 mol/L；氮气吹扫排空氧气后，用火焰将安瓿瓶封口，做好标记，并用锡箔纸裹紧后，160℃下消解40 min；消解完成后取出并充分冷却后在离心机作用下离心10 min，然后准确移取100 μL的水解产物上清液于色谱样品瓶的内衬管中，经氮气吹干后，加入20 μL超纯水重新溶解，再次进行氮吹以去除残余的盐酸；加入100 μL的超纯水，经涡旋振荡使水解产物充分溶解混匀后，经高效液相色谱分离并测定尿嘧啶（U）和胸腺嘧啶（T）核碱基的含量；将藻细胞中的尿嘧啶含量与胸腺嘧啶含量的比值（[U]/[T]）对藻类最大生长速率（μ_max）作图，并建立回归模型；(3)，微藻群落原位生长速率的测定，按步骤(2)的方法收集野外水环境中的微藻细胞，酸消解后用于核碱基含量分析，计算微藻细胞的[U]/[T]比值，最后利用步骤(2)建立的回归模型反演出野外环境中的藻类群落生长速率（μ），即微藻群落原位生长速率。