快速低成本制备DNA Ladder的方法

摘要

本发明提供了一种快速低成本制备DNA Ladder的方法。本发明通过PCR扩增的方法获得DNA Ladder所需要的条带，所有条带的大小和浓度都可以精确控制，不受传统方法（如EcoR I 酶切λ DNA）受酶切位点和质粒浓度的限制，生产成本能降低90%；再通过将含有目标大小片段构建到pMD18-T载体上，利用载体上的通用引物分别对每个片段进行PCR扩增，DNA ladder的每一个DNA片段再按照设计好浓度进行稀释与混合，最终快速廉价的制备大小、浓度均可控的DNA ladder。解决了传统酶切方法成本高、获得DNA片段大小与浓度不可控制的难题。而采用本发明方法制造的DNA ladder清晰度与指示效果与商用DNA ladder基本相当，可以代替商用DNA ladder使用。

主权项

一种快速低成本制备DNA Ladder的方法，其特征在于：根据DNA Ladder所需要的条带大小，从已知基因组序列中选取目标大小的DNA序列，采用设计好的引物进行PCR进行扩增，切胶回收后将不同大小的条带分别构建到pMD18‑T载体，并提取质粒，获得各个片段的模板；采用载体上公用引物大量扩增获得个目的片段，测定其浓度，按照设计好的浓度进行混合与稀释，得到最终DNA ladder。