一种簸箕柳抗性苗的制备方法

摘要

本发明公开了一种簸箕柳抗性苗的制备方法，包括外植体和制备和预培养、侵染菌液的制备、侵染、共培养、洗菌，分化筛选培养直至分化出可见卡那霉素抗性芽，转移到不定芽伸长筛选培养基上继续培养，待抗性芽伸长至1-2cm，将每个抗性芽分离独立，移入生根筛选培养基中培养，经过一段时间的继代培养即可得到完整的抗性苗。该方法包括从外植体选择、培养基筛选、激素调配、抗生素敏感性、培养条件等方面建立出簸箕柳抗性苗的系统制备方法，为林木基因功能研究提供新途径。

主权项

一种簸箕柳抗性苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）将簸箕柳组培苗置于基本培养基上继代繁殖；2）选取继代的组培苗茎，剪成1‑2 cm长的茎段，剪去周围的叶片，作为外植体接种于分化培养基上预培养2‑3d；分化培养基为WP培养基，附加细胞分裂素6‑BA 0.1‑1.0 mg/L，细胞分裂素TDZ 0.005 mg/L，生长素IBA 0.01‑0.005mg/L，蔗糖30 g/L，水晶洋菜2 g/L；3）挑取农杆菌的菌落接种到含有卡那霉素的LB液体培养基中，振荡培养后，取部分转接至LB液体培养基中，待菌体进入指数生长期，通过离心得到菌体，取WP液体养基培养基悬浮菌体，获得侵染菌液；4）将步骤2）的预培养后的茎段浸入步骤3）的侵染菌液，振荡，浸泡10‑20min后，除去多余菌液，放回分化培养基上进行共培养；5）对共培养后的茎段洗涤除去农杆菌，转移到分化筛选培养基上培养，定期更换分化筛选培养基，直至分化出可见卡那霉素抗性芽；6）将卡那霉素抗性芽连转移到不定芽伸长筛选培养基上继续培养；7）待抗性芽伸长至1‑2cm，将每个抗性芽分离独立，移入生根筛选培养基中培养，经过一段时间的继代培养即可得到完整的抗性苗。