发明名称 |
一种检测转基因植物中靶标siRNA池的方法 |
摘要 |
本发明公开了一种检测转基因植物中靶标siRNA池的方法,其包括:以目标基因DNA为模板制备DIG-UTP标记的反义RNA链:反应体系包括:UTP、ATP、GTP、CTP,DIG-UTP、RNA聚合酶缓冲液、目标DNA、RNA聚合酶、去离子水,10~50℃反应0~24小时;去除目标DNA;沉淀RNA;离心,弃上清,溶解RNA沉淀,获得含有DIG-UTP标记的反义RNA链;通过Northern杂交,以DIG-UTP标记的反义RNA链为探针检测转基因植物中靶标siRNA池。本发明具有高度特异性,且操作简单,成本低,可大幅度减少标靶siRNA池的检测成本。 |
申请公布号 |
CN104975078A |
申请公布日期 |
2015.10.14 |
申请号 |
CN201510252424.1 |
申请日期 |
2015.05.18 |
申请人 |
上海市农业科学院 |
发明人 |
方军;朴钟泽;杨瑞芳;白建江 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
上海开祺知识产权代理有限公司 31114 |
代理人 |
费开逵;崔兆慧 |
主权项 |
一种检测转基因植物中靶标siRNA池的方法,其特征在于,包括如下步骤:1)以目标基因DNA为模板制备DIG‑UTP标记的反义RNA链:①反应体系包括:UTP、ATP、GTP、CTP,DIG‑UTP、RNA聚合酶缓冲液、目标DNA、RNA聚合酶、去离子水,10~50℃反应0~24小时;②然后,反应体系中加入DNA酶,10~50℃反应去除反应体系中的目标DNA;③再,加入去离子水和氯化锂溶液,‑20~0℃中沉淀RNA;④离心,弃上清,加去离子水溶解RNA沉淀,获得含有多个DIG‑UTP标记的高纯度目标反义RNA链;2)以DIG‑UTP标记的反义RNA链为探针检测转基因植物中靶标siRNA池:①将目标基因RNA进行聚丙烯酰胺胶电泳,然后,将目标基因RNA从聚丙烯酰胺胶中转到硝酸纤维素滤膜上,烤干滤膜;②然后,将烤干后的滤膜预杂交后,加入步骤1)获得的DIG‑UTP标记的高纯度目标反义RNA链,杂交过夜;③再,将滤膜清洗,显色、曝光、成像。 |
地址 |
201106 上海市闵行区北翟路2901号 |