能提高多杀菌素产量的基因工程菌及构建方法及应用

摘要

本发明公开了能提高多杀菌素产量的基因工程菌及构建方法及应用，能提高多杀菌素产量的基因工程菌的构建方法，步骤为：①将spnk表达盒插入大肠杆菌-刺糖多孢菌穿梭质粒pOJ260，构建重组质粒pLU101；②将重组质粒pLU101导入刺糖多孢菌（Saccharopolyspora spinosa）ATCC49460中，重组质粒通过同源重组整合至基因组，得到能提高多杀菌素产量的基因工程菌，命名为LU101；本发明的方法构建的基因工程菌，能使多杀菌素的产量提高。

主权项

一种能提高多杀菌素产量的基因工程菌的构建方法，其特征是包括如下步骤：①将spnK表达盒插入大肠杆菌‑刺糖多孢菌穿梭质粒pOJ260，构建重组质粒pLU101；②将spnN表达盒、spnO表达盒、spnP表达盒、spnQ表达盒、spnR表达盒和spnS表达盒、通过粘性末端酶切连接方法插入重组质粒pLU101，构建重组质粒pLU102；③将gtt表达盒、gdh表达盒和kre表达盒插入重组质粒pLU102，构建重组质粒pLU104；④将所述重组质粒pLU104导入刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)ATCC 49460中，含有重组质粒pLU104的大肠杆菌与刺糖多孢菌的比例为：50μL浓度10⁹/mL:50μL浓度10⁸孢子/mL，重组质粒通过同源重组整合至基因组，得到能提高多杀菌素产量的基因工程菌，命名为LU104；所述spnK表达盒由ermE*启动子、spnK编码基因和spnK终止子组成；所述spnN表达盒由spnN启动子、spnN编码基因、spnN终止子组成；所述spnO表达盒由spnO启动子、spnO编码基因、spnO终止子组成；所述spnP表达盒由spnP启动子、spnP编码基因、spnP终止子组成；所述spnQ表达盒由spnQ启动子、spnQ编码基因、spnQ终止子组成；所述spnR表达盒由spnR启动子、spnR编码基因、spnR终止子组成；所述spnS表达盒由spnS启动子、spnS编码基因、spnS终止子组成；所述gtt表达盒由ermE*启动子、gtt编码基因和gtt终止子组成；所述gdh表达盒由ermE*启动子、gdh编码基因和gdh终止子组成；所述kre表达盒由ermE*启动子、kre编码基因和kre终止子组成；所述ermE*启动子的序列是SEQ ID NO.23所示；所述spnK编码基因的序列是SEQ ID NO.13所示；所述spnN编码基因的序列是SEQ ID NO.14所示；所述spnO编码基因的序列是SEQ ID NO.15所示；所述spnP编码基因的序列是SEQ ID NO.16所示；所述spnQ编码基因的序列是SEQ ID NO.17所示；所述spnR编码基因的序列是SEQ ID NO.18所示；所述spnS编码基因的序列是SEQ ID NO.19所示；所述gtt编码基因的序列是SEQ ID NO.20所示；所述gdh编码基因的序列是SEQ ID NO.21所示；所述kre编码基因的序列是SEQ ID NO.22所示。