利用鸡肉加工过程中的废弃器官-鸡头提取乙酰胆碱酯酶的方法

摘要

本发明提供利用鸡肉加工过程中的废弃器官-鸡头提取乙酰胆碱酯酶的方法。本发明是以鸡肉加工中的废弃器官-鸡脑为酶的材料来源，其工艺步骤包括：鸡脑的处理、匀浆液的制备、冷冻离心及粗提液的真空冷冻干燥，即可得到乙酰胆碱酯酶制品。由于传统酶源制得的产品成本高、产量低，而进口酶源价格昂贵，周期较长。本发明经酶源的筛选，充分利用了鸡肉加工过程中废弃器官鸡脑，高值化利用，降低了成本，且经优化及检验，酶活较高，粗酶液酶活可达到3.0～5.0U/mL，比活力可达到0.35～0.5U/mg，为后续乙酰胆碱酯酶纯品的制备提供了基础。

主权项

利用鸡肉加工过程中的废弃器官‐鸡头提取乙酰胆碱酯酶的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)乙酰胆碱酯酶的制备：(1.1)将洗净烘干的表面皿称重，将新鲜的纵向斩开的鸡头用生理盐水冲洗干净，用镊子将鸡脑取出至于表面皿中，去除非脑组织后再次称重；(1.2)将鸡脑与含TritonX‑100的磷酸盐缓冲液混合，得到混合液；(1.3)将步骤(1.2)所得混合液用匀浆机匀浆1～5min后，静置10～60min，得到匀浆液；(1.4)将匀浆液以3000～10000r/min，0～4℃离心10～30min，取其上清液，即得乙酰胆碱酯酶粗提液；(1.5)将步骤(1.4)所得的乙酰胆碱酯酶粗提液的上清液置于表面皿中，进行真空冷冻干燥，收集后即得乙酰胆碱酯酶制品；(2)乙酰胆碱酯酶酶活的测定：(2.1)取0.02～1.0mg的乙酰胆碱酯酶制品，用蒸馏水溶解后，得到酶液，在10mL的比色管内，加入1～5mL磷酸盐缓冲液，再加入0.01～0.1mL酶液混匀，于25～60℃恒温水浴锅中保温5～60min；(2.2)向加入0.1～1.0mL碘化硫代乙酰胆碱溶液和0.1～1.0mL DTNB溶液后混匀；(2.3)于400～500nm波长范围内用比色皿比色，记录吸光度，根据吸光度变化值来计算酶活和比活力,比活力酶活力式中：A—3min时吸光度的变化值；V—反应体系总体积(L)；ε—消光系数，1.36×10⁴L/(mol×cm)；d—比色皿光程，1cm；T—反应时间，3min。