一种诱导辣椒疫霉菌产生毒性分泌蛋白的方法

摘要

本发明涉及一种诱导辣椒疫霉菌产生毒性分泌蛋白的方法，将辣椒疫病病组织带回实验室，先用手术刀片刮掉病株茎基部表面，再用自来水冲洗干净，从病健交界处取0.5cm组织块置于V8培养基，25℃黑暗条件下培养3-4天，直到形成较大的菌落后，将菌碟转接到毒性蛋白液体诱导培养基中，振荡培养15-20天，用滤纸滤去菌丝体，滤液经8000rp，离心30min，上清液加入饱和硫酸铵，12000rpm离心30min，沉淀经透析处理，冻干后获得辣椒疫霉菌分泌的毒性蛋白，-70℃保存。上述方法可以诱导辣椒疫霉菌产生大量毒性分泌蛋白，填补了国内外辣椒疫霉菌致病机理研究中不能获得大量毒性分泌蛋白的空白，具有重大意义。

主权项

一种诱导辣椒疫霉菌产生毒性分泌蛋白的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤:⑴ 将辣椒疫病病株茎基部表面用手术刀片刮掉，再用自来水冲洗干净，干净的茎杆经风干后从病健交界处取0.4‑0.6 cm组织块置于V8固体培养基，置于25℃黑暗条件下培养3‑4天，获得的辣椒疫霉菌菌株，再接种到V8固体培养基上，置于25℃黑暗条件下培养3‑4天，直到形成较大的菌落；⑵ 形成较大的菌落后，将20块直径为5 mm菌碟放到含有150ml的毒性分泌蛋白诱导培养基的500ml三角瓶中，于25℃，150rpm培养15‑20天；⑶ 用Whatman滤纸过滤，滤液经8000rpm离心30min，上清液加入100%饱和硫酸铵溶液至硫酸铵终浓度为33%，于12000 rpm离心30min，沉淀经透析带1KD处理，冻干后获得辣椒疫霉菌毒性分泌蛋白提取物，‑70℃保存。