一种北冬虫夏草的规模化培育方法

摘要

本发明公开了一种北冬虫夏草的规模化培育方法，通过野生北冬虫夏草为出发菌株，经分离、提纯培养，用制做液体的北冬虫夏草菌种，将液体菌种接种到健康、没有发育的柞蚕蛹体上，经盒式栽培或瓶式栽培获得北冬虫夏草。本发明解决了现有人工栽培北冬虫夏草出现僵化率低、出草低、不齐等的技术问题。

主权项

一种北冬虫夏草的规模化培育方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1北冬虫夏草一级、二级母种斜面培养步骤1.1配置培养基，培养基配方为：土豆200g、琼脂20g、柞蚕蛹100g、葡萄糖20g、蛋白胨8g、磷酸二氢钾1.5g、硫酸镁0.75g，1000毫升水；步骤1.2采集野生北冬虫夏草用质量浓度0.1％的汞溶液消毒，无菌水清洗，取其内部组织1立方毫米的小块移接至培养基斜面，放入20℃的恒温箱中培养15天即得北冬虫夏草一级母种斜面；步骤1.3选择僵化率高、出草整齐的一级母种斜面试管再进行扩大培养，得二级母种斜面；步骤2北冬虫夏草液体菌种的制作与培养步骤2.1配置培养基，按质量分数培养基配方为：活柞蚕蛹10％、葡萄糖1％、蛋白胨1％、速溶奶粉1％、磷酸二氢钾0.15％，硫酸镁0.075g，1000ml水，1只鸡蛋清；步骤2.2接种二级母种，在21℃恒温箱内静止培养24h后，用150r/min往复式摇床进行振荡培养96h后，选取合格菌种；步骤3注射接种选取蚕蛹在发酵终了前1d进行注射接种，注入菌种0.08～0.15ml，送发菌室内发菌；步骤4菌丝培养步骤4.1低温避光环境下培养，温度前3d控制为16℃，3d～8d控制为18℃，湿度60％以上；步骤4.2将僵化好的蚕蛹21～22℃避光条件下培养，促使菌丝后熟，转向生殖生长阶段；步骤5诱导原基形成与出草管理步骤5.1将生殖生长阶段的僵蛹的三分之一处划刀口，划口后的僵蛹不立即见光，在温度21～22℃，湿度80％以上的暗室培养中3天，待僵蛹的环节及划口处长出白色菌丝，再装瓶见光出草；步骤5.2将菌丝营养生长结束的蚕蛹，用2g/L臭氧水蛹体表面消毒10min，控净表面自由水后在无菌室上瓶，送到出草室培养出草；步骤5.3待原基形成后温度控制在19～22℃，蛹虫草长到1cm高时，将室内的相对湿度调高至75％～80％，经过15～17d，蛹虫草生长高度接近瓶口即可采收。