一种无土培育微稻苗接种稻纹枯病的人工发病方法

摘要

本发明公开了一种无土培育微稻苗接种稻纹枯病的人工发病方法，该发明包括一套配套器具与实施方法步骤。配套器具的构件由培养皿、玻璃罩、平底盘组成。实施方法步骤如下：1）配套器具准备；2）育苗用水琼脂基质平板的制备；3）微稻苗培育；4）接种体准备；5）接种操作；6）接种后管理。本发明的优点是：无土育苗，容易实现全过程的无菌化；整套方法全程时间短；占用空间小；空间利用率高；温度、湿度和水肥等重要发病条件容易控制，一致性好；病害反应清晰稳定，结果重现性好；实施操作简易，过程管理简单；总体技术简单，容易实现技术方法的标准化。

主权项

一种无土培育微稻苗接种稻纹枯病的人工发病方法，其特征在于，实施操作步骤如下：1)配套器具准备：使用前用洁净剂洗涤干净培养皿、玻璃罩、平底盘；2)育苗用水琼脂基质平板的制备：用水、琼脂作无土培育微稻苗的基质，水琼脂基质平板的制备方法是：按比例：琼脂/水＝3g/1000ml，称取琼脂放入干净水中，加热至全部琼脂熔化后，倒入培养皿中，形成5mm厚的水琼脂基质平板；3)微稻苗培育：取水稻种子按常规方法浸种催芽，选取催芽萌动一致的种子点播到制备好的水琼脂基质平板面上，将种子留在面上或按压入水琼脂基质平板内；将播种后的培养皿转入平底盘内，取玻璃罩将培养皿罩在平底盘内，取清水注入平底盘，形成和保持薄层浅水，使玻璃罩内部封闭并形成罩内稳定的高湿状态；将全套育苗装置放在室内能采光的地方，一般明亮的室内散射光即能满足微稻苗生长的要求，应避免直射阳光的照晒，这容易引起玻璃罩内增温，在温度为30℃条件下培育；培育的微稻苗，播种后培育3天的苗高4～5cm最合适；4)接种体准备：将待接种菌株移植到PSA平板培养基上，PSA平板培养基为：马铃薯200g；蔗糖20g；琼脂20g；水1000ml；在温度30℃下培养至菌落刚长满平板，取直径为6mm打孔器在平板菌落外周打取大小一致的菌丝琼脂圆块，以此菌丝琼脂圆块作为定量接种的接种体；5)接种操作：取步骤3)培育获得的微稻苗，打开微稻苗上方的玻璃罩，挑取步骤4)的菌丝琼脂圆块定量接种放置在微稻苗基部水琼脂基质平板面上，菌丝琼脂圆块边缘触及微稻苗基部；6)接种后管理：接种完成后，补充平底盘的薄层浅水，重新罩上玻璃罩，回到原来育苗的条件下继续培育，将温度条件改变为28℃，接种30小时后可见发病坏死斑，随时间推移到接种3天后，微稻苗上呈现清晰的较大病斑。