一种小体系快速测定水体硝酸盐的方法

摘要

本发明公开了一种小体系快速测定水体硝酸盐的方法。本发明设计了1ml的反应体系，通过优化1ml反应体系中各溶液用量，以及锌卷用量以及反应时间，使得体系的稳定性好，还原率高，本发明操作简单、耗时少、需要样品量少等，解决了常规水体硝酸盐测定方法使用样品量多、耗时长、过程繁琐等问题，是一种在海上简单、准确、实时测定水体微量硝酸盐的方法。

主权项

一种小体系快速测定水体硝酸盐的方法，其特征在于，包括以下步骤：一、当待测样品为淡水样品时：A、标准工作曲线的制定：配制硝酸盐标准溶液，采用盐度为5.0的人工海水进行梯度稀释，再取各梯度稀释的硝酸盐溶液1.0ml，在其中加入面积1×1.5cm²锌卷，再加入20μl 20g/L的氯化镉溶液，用涡旋混合器震荡涡旋混合10min，然后将锌卷取出，再加入20μl 10g/L对氨基苯磺酰胺溶液，放置5min，再加入20μl 1g/L 1‑奈替乙二胺二盐酸溶液，混匀，放置15min，将待测溶液转移到酶标板中，以盐度为5.0的人工海水作参比，用酶标仪于543nm波长处测定吸光值As，An＝As‑A_b，其中A_b为空白吸光值，An为扣除空白后的吸光值，以An为纵坐标，硝酸盐‑氮的浓度Cs为横坐标绘制标准工作曲线，并用线性回归法求出标准工作曲线截距a和斜率b；B、水样测定：将该淡水样品的盐度调整为5～10，取调整盐度后的淡水样品1ml，在其中加入面积1×1.5cm²锌卷，再加入20μl 20g/L的氯化镉溶液，用涡旋混合器震荡涡旋混合10min，然后将锌卷取出，再加入20μl 10g/L对氨基苯磺酰胺溶液，放置5min，再加入20μl 1g/L 1‑奈替乙二胺二盐酸溶液，混匀，放置15min，将待测溶液转移到酶标板中，以该淡水样品空白吸光值作为参比，用酶标仪于543nm波长处测定吸光值，该吸光值减去参比空白吸光值即为待测水样的吸光值A_w；同时测定待测水样中原有亚硝酸盐的净平均吸光值C、锌镉还原率测定a、淡水样品：各量取1.0ml盐度为5.0的人工海水和用盐度为5.0的人工海水配制含有5.0、10.0μmol/L硝酸盐溶液，分别在其中加入面积1×1.5cm²锌卷，再加入20μl 20g/L的氯化镉溶液，用涡旋混合器震荡涡旋混合10min，然后将锌卷取出，再加入20μl 10g/L对氨基苯磺酰胺溶液，放置5.0min，再加入20μl 1g/L 1‑奈替乙二胺二盐酸溶液，混匀，放置15min，将待测溶液转移到酶标板中，用酶标仪于543nm波长处测定吸光值，其中A_b1、A_b2相同，都为盐度为5.0的人工海水的吸光值，分别为已扣除试剂空白吸光值的含有5.0、10.0μmol/L硝酸盐溶液的吸光值；b、各取1.0ml盐度为5.0的人工海水和用盐度为5.0的人工海水配制含有5.0、10.0μmol/L亚硝酸盐溶液，在其中加入20μl 10g/L对氨基苯磺酰胺溶液，放置5min，再加入20μl 1g/L1‑奈替乙二胺二盐酸溶液，混匀，放置15min，将待测溶液转移到酶标板中，用酶标仪于543nm波长处测定吸光值，其中A_b0为盐度为5的人工海水的吸光值，分别为已扣除试剂空白吸光值的含有5.0、10.0μmol/L亚硝酸盐溶液的吸光值；二、当待测样品为海水样品时A、标准工作曲线的制定：配制硝酸盐标准溶液，采用盐度为20的人工海水进行梯度稀释，再取各梯度稀释的硝酸盐溶液1ml，在其中加入面积1×1.5cm²锌卷，再加入20μl 20g/L的氯化镉溶液，用涡旋混合器震荡涡旋混合10min，然后将锌卷取出，再加入20μl 10g/L对氨基苯磺酰胺溶液，放置5min，再加入20μl 1g/L1‑奈替乙二胺二盐酸溶液，混匀，放置15min，将待测溶液转移到酶标板中，以盐度为20的人工海水作参比，用酶标仪于543nm波长处测定吸光值As，An＝As‑A_b，其中A_b为空白吸光值，An为扣除空白后的吸光值，以An为纵坐标，硝酸盐‑氮的浓度Cs为横坐标绘制标准工作曲线，并用线性回归法求出标准工作曲线截距a和斜率b；B、水样测定：将该海水样品的盐度调整为17～35，取调整盐度后的海水样品1ml，在其中加入面积1×1.5cm²锌卷，再加入20μl 20g/L的氯化镉溶液，用涡旋混合器震荡涡旋混合10min，然后将锌卷取出，再加入20μl 10g/L对氨基苯磺酰胺溶液，放置5min，再加入20μl 1g/L 1‑奈替乙二胺二盐酸溶液，混匀，放置15min，将待测溶液转移到酶标板中，以该海水样品空白吸光值作为参比，用酶标仪于543nm波长处测定吸光值，该吸光值减去参比空白吸光值即为待测水样的吸光值A_w；同时测定待测水样中原有亚硝酸盐的净平均吸光值C、锌镉还原率测定a、海水样品：各取1ml盐度为20的人工海水和用盐度为20的人工海水配制含有5.0、10.0μmol/L硝酸盐溶液，分别在其中加入面积1×1.5cm²锌卷，再加入20μl 20g/L的氯化镉溶液，用涡旋混合器震荡涡旋混合10min，然后将锌卷取出，再加入20μl 10g/L对氨基苯磺酰胺溶液，放置5min，再加入20μl 1g/L 1‑奈替乙二胺二盐酸溶液，混匀，放置15min，将待测溶液转移到酶标板中，用酶标仪于543nm波长处测定吸光值，其中A_b3、A_b4相同，都为盐度为20的人工海水的吸光值，分别为含有5.0、10.0μmol/L硝酸盐溶液的吸光值；b、各取1ml盐度为20的人工海水和用盐度为20的人工海水配制含有5.0、10.0μmol/L亚硝酸盐溶液，在其中加入20μl 10g/L对氨基苯磺酰胺溶液，放置5min，再加入20μl 1g/L 1‑奈替乙二胺二盐酸溶液，混匀，放置15min，将待测溶液转移到酶标板中，用酶标仪于543nm波长处测定吸光值，其中A_b0为盐度为20的人工海水的吸光值，分别为已扣除试剂空白吸光值的含有5.0、10.0μmol/L亚硝酸盐溶液的吸光值；D、还原率的计算按照下式计算镀铬锌卷的还原率R：$R=\frac{A_{{\mathrm{NO}}_3^{-}-\mathrm{Nn}}-A_{\mathrm{bn}}}{A_{{\mathrm{NO}}_2^{-}-\mathrm{Nn}}-A_{b0}}\times 100\%$公式中对应的字母代号如下表所示：E、计算水样中硝酸盐‑氮浓度按照下式计算：$c\left({\mathrm{NO}}_3^{-}\right)=\frac{(\overline{A_w}-A_b)-{\bar{A}}_{{\mathrm{NO}}_2^{-}-N}-a}{b}$式中：——水样中硝酸盐浓度，单位为μmol/L；——水样测得的平均吸光值；A_b——样品盐度对应下的人工海水空白吸光值；——该水样在“亚硝酸盐测定”时测得的已扣除空白吸光值的平均吸光值；a——标准工作曲线截距；b——标准工作曲线斜率。